בחירת החומר למחקר וירולוגי תלויה ב. מחקר וירולוגי. ראה מהן "שיטות מחקר וירולוגיות" במילונים אחרים

15.1. מאפיינים של מעבדות מיקרוביולוגיות ואימונולוגיות

כל העבודה עם חיידקים מתבצעת במעבדות, אשר, בהתאם למשימות העיקריות, יכולות להיות מחקר, אבחון או ייצור.

למערכת הבריאות יש:

מעבדות אבחון קליניות מסוגים כלליים או מיוחדים (ביוכימיים, בקטריולוגיים, אימונולוגיים, ציטולוגיים וכו') המהווים חלק מבתי חולים, מרפאות, בתי חולים ומרפאות אחרות מוסדות מניעה;

מעבדות בקטריולוגיות של הפיקוח התברואתי והאפידמיולוגי הממלכתי (GSN);

תַבְרוּאָתִי מעבדות בקטריולוגיות GOS;

מעבדות סניטריות-כימיות של ה-GSN;

מעבדות מרכזיות (TsNIL), בעייתיות, ענפיות, חינוכיות של אוניברסיטאות;

מעבדות מיוחדות (במיוחד זיהומים מסוכניםוכו.).

כיום, מעבדות ומוסדות מעבדה גדולים יותר (מחלקות, מכונים, מפעלי ייצור), ככלל, מתמחים ועובדים עם קבוצה כזו או אחרת של חיידקים.

מטפלים בנגיפים במעבדות וירולוגיות בעלות הציוד המתאים ומשתמשות בשיטות מחקר מיוחדות. ישנן מעבדות מיקולוגיות ופרוטוזואולוגיות. אופי מיוחד

כמו כן נרכשות מעבדות בקטריולוגיות, בהן מתרכזת העבודה בקבוצות מסוימות של חיידקים, למשל, ריקטסיאלי, שחפת, לפטוספירלי, אנאירובי וכו'. מחקרים אימונולוגיים מתבצעים במעבדות אימונולוגיות, אם כי ניתן לבצע סוגים מסוימים של מחקרים גם במיקרוביולוגיים. מעבדות, למשל, סרודיאגנוזיס של מחלות זיהומיות.

עבודת מעבדה עם חיידקים פתוגניים מתבצעת במעבדות מאובזרות במיוחד המבטיחות את מצב הפעולה ואמצעי זהירות השוללים אפשרות של הדבקה של צוות ודליפה של חיידקים מחוץ למעבדה.

הצורך בוויסות ברור של תנאי העבודה עם חיידקים, המסוכנים בדרגות שונות לעובדי המעבדה ולאוכלוסיית הסביבה, הוביל לפיתוח סיווג של חיידקים, המחלק אותם ל-4 קבוצות לפי מידת המפגע הביולוגי שלהם (סיווג ארגון הבריאות העולמי). ). ברוסיה, בהתאם להמלצות WHO, חיידקים פתוגניים מחולקים גם ל-4 קבוצות: קבוצה 1 - פתוגנים של זיהומים מסוכנים במיוחד; קבוצה 2 - פתוגנים של מחלות מגיפה אנושיות מדבקות ביותר; קבוצה 3 - סוכנים סיבתיים של מחלות זיהומיות, המוקצים לעצמאיים קבוצות נוזולוגיות; קבוצה רביעית - חיידקים פתוגניים על תנאי - גורמים סיבתיים של זיהומים אופורטוניסטיים. מספור קבוצות החיידקים שאומצו ברוסיה שונה בסדר הפוך מסיווג ארגון הבריאות העולמי, שבו חיידקים בעלי הפתוגניות הנמוכה ביותר שייכים לקבוצה הראשונה, ובמיוחד מסוכנים לקבוצה הרביעית.

בהתאם לחלוקת החיידקים לקבוצות לפי מידת המפגע הביולוגי, מעבדות מחולקות גם לקטגוריות. על פי המינוח של ארגון הבריאות העולמי, ישנן 3 קטגוריות של מעבדות מיקרוביולוגיות:

בסיסי (בסיסי או סוג כללי- מעבדות, אשר עשויות להיות מצוידות בהתקני הגנה שונים בשל המאפיינים הספציפיים של העבודה;

מעבדות אבטחה (מבודדות) ומעבדות משטר מיוחד (מבודד מקסימלי).

בטיחות העבודה במעבדות מכל הקטגוריות מובטחת על ידי יישום שגרת וכללי העבודה במעבדה, עמידה בדרישות לחצרי המעבדה וציודם, אספקת מעבדות עם ציוד מתאים.

ניטור, פיקוח רפואי על בריאות העובדים, הדרכה והכשרת כוח אדם בבטיחות במעבדה.

15.2. ציוד למעבדות מיקרוביולוגיות ואימונולוגיות

השטח של מעבדת הבסיס צריך להיות מרווח כדי להבטיח התנהלות בטוחה של עבודת המעבדה. קירות, תקרות ורצפות צריכים להיות בעלי משטח חלק וקל לניקוי, אטום לנוזלים ועמיד בפני חומרי חיטוי הנפוצים במעבדה. פני השטח של שולחנות העבודה חייבים להיות עמידים למים, עמידים לחומרי חיטוי, חומצות, אלקליות, ממיסים אורגניים וחום בינוני. ריהוט מעבדה חייב להיות עמיד. החלל מתחת לשולחנות ובין רהיטים צריך להיות נגיש בקלות לניקוי. במעבדה צריך להיות אוטוקלאב לחיטוי פסולת.

ציוד מעבדה בסיסי צריך להגביל או למנוע מגע של המיקרוביולוג עם חומר זיהומי, צריך להיות עשוי מחומרים עמידים, אטומים לנוזלים ועמידים בפני קורוזיה. יש לתכנן ולהתקין את הציוד כך שניתן לנקות אותו בקלות, לטהר אותו ולבדוק אותו.

המעבדה מצוידת במיקרוסקופ, אוטוקלאב, תרמוסטטים, ארונות ייבוש, עיקור, מנגנון קרישה בסרום, מזקק, צנטריפוגות, מאזני מעבדה, מד pH, FEC, בוחש מגנטי ואמבט כביסה.

יש לספק לחצרי העבודה של המעבדה אספקת מים קרים וחמים, חשמל, ואקום, חמצן, אוויר בלחץ גבוה וכו'. חלק מהארונות מצוידים בקופסאות ומנדפים.

מתחם החובה כוללים מעבדות לזיהומי מעיים וטיפות, סניטריים ובקטריולוגיים, סרולוגיים, וכן מחדרי עזר: כיריים בינוניות, חדר כביסה, חדר עיקור (נקי ומלוכלך), מרשם, מחסנים, שירותים לעובדים, א. בִּיבָר. במעבדות עם נקודות לבדיקה להובלת מיקרואורגניזמים, יציידו בנוסף חדר קבלה, חדר טיפולים, שירותים לדגימה

חוֹמֶר. מסדרים את המקום בצורה כזו שזרמים מלוכלכים ונקיים לא יצטלבו ולא יגעו.

בהתייחס לחצרים של מעבדות מאובטחות, יש להקפיד על אותן דרישות כמו למעבדת הבסיס. כמו כן, יש להפריד מעבדה מסוג זה מאותם חלקים בבניין בהם תנועת העובדים אינה מוגבלת. יש להצטייד במתקני שטיפת ידיים במתקנים לפתיחת המים באמצעות דוושת רגל או מרפק. חלונות חייבים להיות סגורים ואטומים. דלתות כניסה לחדרי מעבדה צריכות להיות סגירות עצמיות וניתנות לנעילה. אוורור פליטה מתוכנן כך שהלחץ הנמוך ביותר נוצר בחדרים עם הסיכון הגבוה ביותר לזיהום. במקרה זה, תנועת האוויר תתרחש מחדרי העזר לכיוון חדר העבודה הראשי. אוויר הפליטה משתחרר לסביבה רק לאחר סינון באמצעות מסנני חיידקים. כאשר מציידים מעבדות עם אבטחה גבוהה בציוד, הן מונחות לפי ההמלצות שפותחו למעבדות בסיסיות, בתוספת שכל העבודה עם חומר זיהומי בהן מתבצעת בקופסאות מגן. במצב של מעבדות מבודדות מקסימליות, ישנן מספר תכונות להבטחת בטיחות ביולוגית מירבית של הצוות, הציבור והציבור. סביבה. הכניסה למעבדה והיציאה ממנה מתבצעים דרך מחסום סניטרי. בכניסה חובה להחליף לחלוטין לבגדים מיוחדים, ביציאה, לפני החלפת בגדים, חובה לבצע חיטוי ממוקד (מקלחת, חומרי חיטוי) של הצוות. אגרוף משמש להפחתת הסיכון לחדירת חומר זיהומי לסביבה. על ידי שימוש ב קופסאות (משטח שולחן, למינרי) ליצור מחסומים פיזיים כדי למנוע מגע אפשרי של צוות עובדים עם חומר זיהומי.

15.3. כללים לעבודה במעבדה מיקרוביולוגית

הכללים הבסיסיים לעבודה במעבדת הבסיס כוללים:

איסור עבודה עם פיפטה באמצעות הפה;

איסור אכילה, שתייה, עישון, שמירת מזון ושימוש קוסמטיקהבאזורי עבודה;

שמירה על ניקיון וסדר;

חיטוי משטחי עבודה לפחות פעם ביום ולאחר כל מגע עם חומר זיהומי;

נטילת ידיים על ידי הצוות לאחר טיפול בחומרים מדבקים, בעלי חיים, לפני היציאה מהמעבדה;

ביצוע כל העבודה בצורה כזו שתמזער את האפשרות להיווצרות אירוסול;

טיהור של כל החומרים הנגועים לפני השלכה או שימוש חוזר.

15.4. עקרונות אבחון מיקרוביולוגי של מחלות זיהומיות

המקום החשוב ביותר באבחון מעבדתי של מחלות זיהומיות תופס על ידי אבחון מיקרוביולוגי ספציפי, המתבצע במעבדות בקטריולוגיות, וירולוגיות, אימונולוגיות ואחרות. זה מורכב משלושה שלבים: פרה-אנליטי, אנליטי ופוסט-אנליטי.

השלב הראשון של אבחון מיקרוביולוגי הוא קדם אנליטית, כולל לקיחת חומר למחקר. בחירת חומר הבדיקה נקבעת על פי הפתוגנזה והתמונה הקלינית של המחלה המידבקת. חומר הבדיקה נלקח, במידת האפשר, בתנאים אספטיים, מונח במיכל סטרילי ומועבר למעבדה בהקדם האפשרי (רצוי תוך שעה). במקרים מסוימים, זריעה של החומר מתבצעת ליד מיטת המטופל. לפעמים מותר אחסון לטווח קצר של חומר בתנאים מוסדרים. לחומר הנלמד מצורף מסמך, שעליו לציין את זמן הנטילה, מהות החומר, מקורו ולקבוע במדויק את מטרת הלימוד.

החומר למחקר במיקרוביולוגיה רפואית הוא נוזלי גוף ביולוגיים ופתולוגיים שונים (דם, מוגלה, שתן, כיח, נוזל מוחי, צואה, הקאות, שטיפות ועוד) ורקמות - חומר ביופסיה מחיה או נתיחה מגופה. במיקרוביולוגיה סניטרית לוקחים למחקר חפצים סביבתיים (אוויר, מים, מזון וכו') או ספוגיות מהם. כאשר לוקחים חומר

לה עבור מחקר מיקרוביולוגייש להקפיד על הכללים הבאים:

החומר נלקח ישירות ממקור הזיהום או שההפרשה המקבילה (מוגלה, שתן, מרה וכו') נבדקת;

כמות החומר צריכה להספיק לביצוע המחקר ולחזור עליו במידת הצורך;

החומר נלקח, אם אפשר, בתקופה הראשונית של המחלה, שכן בתקופה זו מבודדים פתוגנים לעתים קרובות יותר, יש יותר מהם, יש להם לוקליזציה אופיינית יותר;

החומר נלקח לפני תחילת כימותרפיה אנטי-מיקרוביאלית או לאחר פרק זמן מסוים לאחר נטילת התרופה האנטיבקטריאלית, הנחוצה להסרתה מהגוף;

יש צורך למנוע את האפשרות להיכנס לחומר של תכשירים אנטי-מיקרוביאליים (חומרי חיטוי, חיטוי, אנטיביוטיקה);

הובלת החומר למעבדה צריכה להתבצע כ זמן קצר, בתנאים המוציאים מכלל מוות של מינים חיידקיים לא יציבים, או מניחים אותו באמצעי הובלה מיוחדים;

במהלך ההובלה, יש להקפיד על כל כללי הבטיחות הביולוגיים;

מצורף לחומר מסמך נלווה, המכיל את המידע הבסיסי הדרוש לביצוע מחקר מיקרוביולוגי (שם משפחה, שם פרטי, פטרונימי המטופל, מספר סיפור המקרה, אבחנה קלינית וכו').

15.5. שיטות אבחון מיקרוביולוגי

השלב האנליטי כולל שיטות מיקרוסקופיות, תרבותיות, ביולוגיות, סרולוגיות ואלרגולוגיות של אבחון מיקרוביולוגי.

שיטה מיקרוסקופית מורכבת מהכנת תכשירים (מקוריים או מוכתמים בשיטות פשוטות או מורכבות) מהחומר הנבדק ומיקרוסקופ שלהם באמצעות סוגים שונים של ציוד מיקרוסקופי (אור, שדה כהה, ניגודיות פאזה, זוהר, אלקטרוני וכו'). בבקטריולוגיה השיטה המיקרוסקופית נקראת בקטריוסקופית, בווירולוגיה - וירוסקופיה.

שיטה תרבותית מורכב בזריעת חומר הבדיקה על מלאכותי תקשורת תרבות, תרביות תאים או עוברי אפרוחים לצורך בידוד וזיהוי תרבית טהורה של הפתוגן או הפתוגנים. בבקטריולוגיה נקראת שיטת התרבות בקטריולוגי, במיקולוגיה - מיקולוגי, בפרוטוזואולוגיה - פרוטוזואולוגי, בווירולוגיה - וירולוגי.

שיטה ביולוגית (ניסוי או ביולוגי) מורכב מהדבקה של חיות מעבדה רגישות או חפצים ביולוגיים אחרים (עוברי תרנגולת, תרביות תאים) בחומר הבדיקה. הוא משמש לבידוד תרבית טהורה של הפתוגן, קביעת סוג הרעלן, פעילותן של תרופות כימותרפיות אנטי-מיקרוביאליות וכו'.

שיטה סרולוגית מורכב בקביעת הטיטר של נוגדנים ספציפיים בסרום הדם של המטופל, לעתים רחוקות יותר בזיהוי אנטיגן מיקרוביאלי בחומר הבדיקה. לשם כך משתמשים בתגובות חיסוניות.

שיטה אלרגולוגית מורכב מזיהוי אלרגיה זיהומית (HRT) לאלרגן מיקרוביאלי אבחנתי. למטרה זו, עור בדיקות אלרגיותעם אלרגנים רלוונטיים.

הערך האבחוני של שיטות אלו אינו שווה. השיטה המובילה לאבחון מיקרוביולוגי היא שיטה בקטריולוגית, מכיוון שהוא מאפשר לבודד ולזהות את הגורם הגורם לחיידקים, כלומר. שורש המחלה. השיטות הנותרות פחות אינפורמטיביות, מכיוון שהן מאפשרות לך לזהות שינויים בגוף עקב נוכחות של חיידק בו. השני בחשיבותו הוא שיטה סרולוגית, שכן האינטראקציה של אנטיגן ונוגדן מאופיינת ברמה גבוהה של ספציפיות. תכולת המידע של שלוש השיטות האחרות נמוכה, והן משמשות לרוב כתוספת לשיטות בקטריולוגיות וסרולוגיות. לפיכך, מיקרוסקופיה של החומר הנחקר לא תמיד מאפשרת לנו לראות ולזהות חיידקים במיקרוסקופ. ניתן לזהות אותם רק כאשר החומר מזוהם בהם מאוד. אפילו מציאת חיידקים במיקרוסקופ, אי אפשר לזהות אותם מורפולוגית למין. כידוע, כל מגוון המינים של החיידקים מצטמצם ל-4 צורות מורפולוגיות עיקריות: קוקוסים, מוטות, צורות מפותלות ומסתעפות. לכן, לפי מיקרו

בתמונה הסקופית, ניתן לייחס את החיידקים שנצפו באופן טנטטיבי מאוד לטקסון גדול, למשל, קוקי גראם חיובי. רק במקרים בודדים, כאשר לחיידקים יש מורפולוגיה ייחודית, ניתן לקבוע מיקרוסקופית את סוגם. תכולת המידע של השיטה המיקרוסקופית של פטריות ופרוטוזואה גבוהה יותר, שכן לפטריות ולפרוטוזואה, בהיותם אוקריוטים, גדלים גדולים יותר ומורפולוגיה אופיינית יותר.

יכולות האבחון של השיטה הביולוגית מוגבלות בשל העובדה שחיות מעבדה חסינות בפני רוב הפתוגנים של זיהומים אנתרופונוטיים אנושיים, ולכן לא ניתן לגרום לזיהום ניסיוני בהם.

האפשרויות של השיטה האלרגולוגית מוגבלות על ידי העובדה שרוב החיידקים בגוף האדם אינם גורמים ל-HRT.

מאז המחקר המיקרוביולוגי הוא אחד הסוגים היקרים ביותר של מחקר מעבדה, המיקרוביולוג עומד בפני המשימה לבצע אבחנה מיקרוביולוגית אמינה במינימום הוצאות של זמן, מאמץ וכסף. לכן, 1-5 שיטות אבחון משמשות לביצוע אבחון, כך שמערכת השיטות שנבחרה מבטיחה את התשובה הנכונה.

חשיבות מיוחדת הן שיטות האבחון המהיר, המאפשרות ביצוע אבחון מיקרוביולוגי תוך פרק זמן קצר (ממספר דקות ועד מספר שעות) מרגע מסירת חומר הבדיקה למעבדה. שיטות אקספרס כוללות RIF, ELISA, RIA, PCR, שימוש בביושבבים, כרומטוגרפיה וכו'. תכונות האבחון של זיהומים אנאירוביים מתוארים בחומרי הדיסק.

יחד עם השיטות הקלאסיות המסורתיות של אבחון מיקרוביולוגי ב השנים האחרונותשיטות אבחון ביולוגיות מולקולריות (בדיקות DNA, PCR, תגובת שרשרת ליגאז - LCR, כרומטוגרפיה, אלקטרופורזה, אימונובלוט, ביו-שבבים וכו') הופכות חשובות יותר ויותר.

שיטות אבחון ביולוגיות מולקולריות מבוססות על זיהוי של DNA ו-RNA ספציפיים למין חיידקי נתון, וכוללות הכלאה המבוססת על בדיקות DNA ואבחון המבוסס על PCR.

פוסט אנליטי שלב האבחון המיקרוביולוגי הוא פרשנות קליניתתוצאות מחקרי מעבדה. במקביל, על הרופא המטפל להעריך את המשמעות האטיולוגית של החיידקים המבודדים מהמטופל, להתאים את האמפיריה. כימותרפיה אנטי-מיקרוביאליתוכו.

15.5.1. שיטות אבחון מיקרוביולוגי זיהומים חיידקיים

בבקטריולוגיה משתמשים בשיטות בקטריוסקופיות, בקטריולוגיות וביולוגיות לאיתור פתוגן בחומר הבדיקה.

היתרונות של השיטה הבקטריוסקופית הם פשטות, מהירות, חסכון. עם זאת, הוא מוצא שימוש מוגבל, שכן ניתן להשתמש בו רק אם יש מאפיינים מורפולוגיים או טינקטוריים של הפתוגן ותכולתו מספקת בחומר הבדיקה. שיטה זו היא אינדיקטיבית.

השיטה העיקרית והמדויקת ביותר לאבחון זיהומים חיידקיים היא בקטריולוגית, המשמשת כמעט לכל המחלות, למרות חסרונותיה: משך המחקר (בין 4-5 ימים לחודשיים), סכנה (מאז התרבות טהורה של הפתוגן מצטבר), עלות גבוהה יחסית. במקרה שחומר הבדיקה צפוי להכיל את הפתוגן בכמות מספקת, החומר נזרע על גבי חומרי הזנה צפופים לקבלת מושבות מבודדות. עם תכולה נמוכה של חיידקים, חומר הבדיקה נזרע תחילה על חומרי הזנה נוזליים - חומרי העשרה. התרבות הטהורה המבודדת מזוהה על ידי תכונות מורפולוגיות, טינקטוריות, תרבותיות, ביוכימיות, אנטיגניות ורעילות (בהתאם לסוג הפתוגן). ההגדרה של המאפיינים המפורטים מאפשרת לך להגדיר את סוג הפתוגן. לצורך סימון אפידמיולוגי, מתבצע זיהוי תוך-ספציפי של התרבות המבודדת: נקבעים ה-fagovar, biovar שלה וכו'. בנוסף, כדי לקבוע טיפול רציונלי, ככלל, נקבעת רגישות התרבות המבודדת לאנטיביוטיקה.

באבחון מיקרוביולוגי של מחלות הנגרמות על ידי חיידקים אופורטוניסטים, נציגי המיקרופלורה הרגילה, חובה לקבוע את מספר הפתוגנים בחומר הבדיקה.

השיטה הביולוגית אינה חסכונית, לא אנושית, ולכן מוצאת לה יישום מוגבל. עכברים לבנים, שפני ניסיונות, ארנבות, קופים וחיות אחרות משמשים כחיות ניסוי.

אִבחוּן מחלה מדבקתכמו כן, ניתן לקבוע באמצעות השיטה הסרולוגית, המאפשרת לזהות נוגדנים ספציפיים בסרום המטופל או אנטיגנים ספציפיים ישירות בחומר הבדיקה. נוגדנים לגורם הסיבתי של המחלה מופיעים, ככלל, בסוף השבוע הראשון של המחלה. חוסר היכולת לאתר אותם בימים הראשונים של המחלה מהווה חיסרון רציני של השיטה, במיוחד במקרים בהם המחלה חריפה. בנוסף, מחלות רבות דורשות חקר יצירת נוגדנים בדינמיקה ואיתור עלייה במספר הנוגדנים, מה שגם אינו מאפשר אבחון מהיר. החיסרון של השיטה הוא שהיא לא יכולה לזהות במדויק את הפתוגן ולקבוע את האנטיביוגרמה שלו. אך יחד עם זאת מדובר בשיטה בטוחה לחלוטין, זולה יחסית, המאפשרת לבצע אבחון תוך זמן קצר. נכון לעכשיו, במספר מחלות, לא רק הכמות, אלא גם המעמדות של אימונוגלובולינים נקבעים.

בחלק מהמחלות, השיטה הסרולוגית משמשת לאיתור אנטיגנים ספציפיים בחומר הבדיקה. מכיוון שהאנטיגנים הספציפיים המרכיבים את הפתוגן נמצאים בחומר הפתולוגי מהדקות הראשונות של המחלה, גרסה זו של השיטה הסרולוגית משמשת לאבחון מואץ (במהלך היום הראשון למחלה) או אפילו מפורש (תוך מספר שעות) של מחלות מדבקות.

כאמצעי עזר בקבוצה קטנה של מחלות זיהומיות, נעשה שימוש בשיטה אלרגולוגית, המאפשרת לזהות רגישות יתר לאנטיגן ספציפי (אלרגן), שהוא הגורם הגורם למחלה.

15.5.2. שיטות אבחון מיקרוביולוגי זיהום ויראלי

בשיטות וירולוגיה אבחון מעבדהלזיהומים ויראליים יש מאפיינים משלהם, בהתחשב בביולוגיה של וירוסים. נעשה שימוש בשיטות וירוסקופיות, וירולוגיות וסרולוגיות לאבחון מעבדה.

שיטת הוירוסקופיה מורכבת מזיהוי הנגיף בחומר הבדיקה במיקרוסקופ. מיקרוסקופ אלקטרוני משמש לעתים קרובות יותר, לעתים רחוקות יותר מיקרוסקופ פלואורסצנטי. בשל הגודל הזניח של וירוסים, כמעט ולא נעשה שימוש במיקרוסקופ אור. רק לזיהוי וירוסים גדולים, באמצעות שיטות צביעת על, ניתן להשתמש במיקרוסקופ אור. בנוסף, בעזרת מיקרוסקופ אור ניתן לזהות תכלילים תוך תאיים, הנוצרים בתאים הפגועים בזמן זיהומים מסוימים.

השיטה הווירולוגית מורכבת מהדבקה של מודל ביולוגי רגיש (חיות מעבדה, עוברי עוף או תרביות תאים) בחומר הבדיקה, המצביע על הנגיף וזיהויו לאחר מכן. כאשר חיות מעבדה נדבקות, חיווי הנגיפים מתבצע בדרך כלל על פי תמונה קליניתמחלות, שינויים פתולוגיים ואנטומיים בערך ולבסוף, למשל, באמצעות תגובת המגלוטינציה. אותה תגובה מאפשרת לזהות וירוסים בעובר עוף, אשר, ככלל, אינו מראה שינויים גלויים במהלך הפתיחה. בתרבית תאים, נוכחות הנגיף נקבעת על ידי הפעולה הציטופטית (כולל יצירת תכלילים תוך-תאיים), ספיחה של המד, תופעת היווצרות הפלאק, תגובת ההמגלוטינציה והיעדר שינוי בצבע האינדיקטור. זיהוי הנגיף מתבצע באמצעות בדיקות סרולוגיות (RPGA, RTGA, RN, RSK, ELISA וכו'). השיטה הווירולוגית מאפשרת לקבוע במדויק את אופי הפתוגן, אך היא דורשת מספיק זמן (5-7 ימים או יותר), עלויות חומר משמעותיות ואינה בטוחה.

תכונה של השיטה הסרולוגית בווירולוגיה היא חקר סמים מזווגים. הסרום הראשון נלקח מהמטופל פנימה תקופה חריפהעם תחילת המחלה, מאוחסן בטמפרטורה של 4-8 מעלות צלזיוס, והנסיוב השני נלקח לאחר 10-14 ימים. סרומים

לחקור בו זמנית. עדות המחלה היא סרוקמרה, כלומר. עלייה בטיטר הנוגדנים בסרום השני ביחס לראשון. המרה סרוקית של פי 4 או יותר היא אבחנתית. מכיוון שמחלות ויראליות רבות הן חריפות, גרסה זו של השיטה הסרולוגית משמשת בדרך כלל לאבחון רטרוספקטיבי.

השיטה המובילה לאבחון מעבדתי של זיהומים ויראליים היא וירולוגית.

אבחון מואץ ומפורש של מחלות ויראליות מתבצע באותו אופן כמו עבור זיהומים חיידקיים.

15.5.3. תכונות של אבחון מיקרוביולוגי של mycoses

בדרך כלל משתמשים בשיטה המיקרוסקופית לאבחון זיהומים פטרייתיים. השיטה המיקולוגית מורכבת מזריעת חומר פתולוגי על חומרי הזנה מיוחדים, בידוד תרבית טהורה של הפתוגן וזיהויו לפי תכונות מורפולוגיות, תרבותיות וביוכימיות. תכונה של שיטה זו היא משך הזמן שלה - מספר שבועות עקב צמיחה איטית של פטריות. גילוי נוגדנים במהלך בדיקה סרולוגית אפשרי החל מהשבוע ה-2-4 למחלה. בחלק מהמחלות מתגלים אנטיגנים ספציפיים בחומר הבדיקה. השיטה האלרגולוגית משמשת לעתים רחוקות. לעתים קרובות, עם mycoses, שיטה היסטולוגית משמשת, המורכבת באיתור אלמנטים של הפטרייה (נבגים, ראשי קונידיאליים וכו') באיברים ורקמות המושפעים מפטריות. לשם כך מכינים חתכים היסטולוגיים של רקמה דקה או אולטרה-דקה, צובעים בשיטות היסטולוגיות והיסטוכימיות מיוחדות, ונבדקים במיקרוסקופ אור ובמקרה הצורך אלקטרונים.

15.5.4. תכונות של אבחון מיקרוביולוגי של זיהומים פרוטוזואלים

בדיקה מיקרוסקופית של חומר פתולוגי מורכבת מהכנת הן תכשירים מקומיים ("טיפה עבה") והן מריחות מוכתמות בשיטת רומנובסקי-גימסה, והיא השיטה העיקרית לאבחון מחלות הנגרמות על ידי פרוטוזואה. במקרים מסוימים, נעשה שימוש בשיטות אבחון סרולוגיות ואלרגולוגיות.

15.6. עקרונות אבחון אימונולוגימחלות אנושיות

אימונודיאגנוסטיקה היא מדור אימונולוגיה החוקר ומפתח שיטות לאבחון מחלות זיהומיות ולא זיהומיות הקשורות לתפקוד מערכת החיסון.

מחלות זיהומיות רבות עברו כיום שינויים משמעותיים, המתבטאים בעלייה בשיעור הצורות הקלות, המחוקות והא-סימפטומטיות, עליה במרכיב האלרגי ותדירות גבוהה של זיהומים מעורבים. הדבר מסבך את האבחון המסורתי של מחלות, ולכן החשיבות של אבחון אימונודיאגנוסטי, שמטרתו חיפוש אחר אנטיגנים פתוגנים או שינויים חיסוניים ספציפיים בגופו של החולה, גוברת.

תחת פעילות חיסונית ( מצב חיסוני, פרופיל חיסוני) להבין את היכולת מערכת החיסוןלתגובה החיסונית בזמן נתון. הוא מאופיין בריכוז האימונוגלובולינים, מספר הלימפוציטים והלוקוציטים, היחס בין תאי T ו-B ואינדיקטורים תפקודיים, בפרט ביכולתם של תאים בעלי יכולת חיסונית להגיב לגירוי.

15.7. בקרת איכות של מחקר מעבדה

מרכיב חשוב בעבודת המעבדה המיקרוביולוגית והאימונולוגית הוא השגת תוצאות בדיקה מדויקות ובר השוואה, עבורן יש צורך בקרה על איכות המחקרים. בקרת איכות יכולה להיות פנימית או חיצונית.

בקרת איכות תוך מעבדתית - מערכת אמצעי בקרה המתבצעים במעבדה נפרדת על ידי אנשי מעבדה זו ומטרתם להבטיח את רמת האיכות המתאימה של עבודת המעבדה.

בקרת איכות חיצונית - מערכת של אמצעי בקרה המתבצעים במסגרת המערכת הפדרלית המאוחדת להערכת איכות חיצונית (FSVOK) של מחקר מעבדה על ידי קבוצות מומחים ומטרתם להבטיח את הארגון הנכון תהליכים טכנולוגייםהפקת מחקר מעבדה.

המערכת הפדרלית של הערכה חיצונית של איכות מחקר המעבדה מורכבת מחלקים, שבתוך כל אחד מהם

מתבצעת הערכה של איכות סוג מסוים של מחקר מעבדה. המבנה של FSMOK כולל קבוצות מומחים לפיתוח ויישום בקרת איכות חיצונית ב סוגים שוניםמחקר מעבדה.

משימות לאימון עצמי (שליטה עצמית)

א.שם את שיטת המחקר המיקרוביולוגי, המאפשרת לקבוע את סוג הפתוגן:

1. אלרגי.

2. מיקרוסקופי.

3. תרבותי.

4. ביולוגי.

ב.שם את המשימה העיקרית של שיטת המחקר הבקטריולוגית.

ב.סרום נלקח מחולה עם חשד לזיהום ויראלי ביום ה-7 למחלה, בו נמצאו נוגדנים אנטי-ויראליים ספציפיים. הערכת מהימנות תוצאת המחקר.

G.ציין את סוג המעבדה שאליה יש לשלוח חומר ממטופל החשוד בזיהום מסוכן במיוחד.

מחקרים וירולוגיים במרפאת מחלות זיהומיות הופכים חשובים יותר ויותר, דבר הנובע בעיקר מהעלייה בשיעור הזיהומים בעלי אופי ויראלי, שהמרפאה שלהם לא תמיד אופיינית. יחד עם זאת, לא פותחו שיטות מהירות ואמינות לאבחון וירולוגי לכל המחלות המדבקות, רבות מהן גוזלות זמן ודורשות תנאים מיוחדים, חיות ניסוי, מדיה תזונתית וצוות מאומן. נכון לעכשיו, 3 סוגים עיקריים של מחקר משמשים לאבחון זיהומים ויראליים.
1. בדיקה מיקרוסקופית של חומר זיהומי על מנת לזהות אנטיגן ויראלי או שינויים פתוגנומוניים ברקמות. למטרות אבחון, ישיר בדיקה מיקרוסקופיתחומר זיהומי של חולים משמש למספר מוגבל של זיהומים ויראליים (כלבת, אבעבועות רוח, קדחת צהובה, הרפס וכו'). יותר יישום רחבקיבלה שיטה המבוססת על זיהוי אנטיגן ויראלי באמצעות נוגדנים פלואורסצנטיים. השיטה של אימונופלואורסצנטי יכולה להיות אמינה רק אם כל הדרישות הטכניות מתקיימות בקפדנות.
2. שיטות וירולוגיות.
3. מחקרים סרולוגיים לקביעת העלייה בטיטר הנוגדנים במהלך המחלה. שיטות מחקר סרולוגיות זמינות יותר במעבדה.
לצורך מחקרים אלו יש צורך בנטילת סרום דם בתקופה החריפה של המחלה ובתקופת ההבראה (סרה מזווגת). דגימות דם למחקרים סרולוגיים נלקחות סטריליות ללא נוגדי קרישה וחומרים משמרים.
השלבים העיקריים של מחקר וירולוגי הם בידוד הנגיפים, זיהוים, אפיון העיקרי תכונות ביולוגיות. להדגיש קבוצות שונותוירוסים כרגע אין שיטה אחת. זה נובע בעיקר מהמגוון של תכונותיהם ותכונות הטיפוח שלהם מחוץ לאורגניזם המארח. לצורך המחקר נעשה שימוש ביובסטרטים (שטיפות מהריריות, הדם ומרכיביו, נוזל מוחי, שתן וצואה, דגימות ביופסיה של איברים ורקמות או חלקים שלהם שנלקחו במהלך הנתיחה), אשר נתונים לעיבוד מיוחד, ולאחר מכן מעבר של החומר. יש לאחסן את החומר שנלקח למחקר בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס עד -70 מעלות צלזיוס. בהתאם לאבחנה המוקדמת, לעיבוד החומר יש מאפיינים משלו, אך בכל המקרים הוא אמור לקבל מצע מטוהר בצורה מקסימלית מזיהומים של ריר, תאי איברים ורקמות או שבריהם, חיידקים. זה מושג על ידי הומוגניזציה של חומר הבדיקה במכשיר מיוחד או טחינה במכתש חרסינה בקור עם זכוכית קוורץ (חתיכות של איברים ורקמות) בתוספת של צונן סטרילי (+4 C) 0.9 %

תמיסת נתרן כלורי לקבלת תרחיף של 10-30% וצנטריפוגה לאחר מכן ב-1500-3000 סל"ד למשך 10-15 דקות. הסופרנטנט המתקבל כך משמש למחקרים נוספים.
לפני הפיתוח האינטנסיבי וההחדרה לתרגול רחב של שיטת תרבית רקמות ותאים, נעשה שימוש בזיהום של חיות ניסוי או עוברי תרנגולת. שיטות אלה עדיין בשימוש היום. גילוי נגיפים באמצעות בעלי חיים מתאים ביותר במקרים בהם ניתן לשחזר בניסוי תמונה אופיינית של מחלה זיהומית או ביטוייה האישיים. לפיכך, ניתן לזהות פתוגנים של arboviruses ו-Coxsackie על ידי זיהום במוח של עכברים יונקים, שפעת - על ידי הדבקה של עוברי עוף או מתן תוך-אף של חומר הבדיקה לעכברים. בשנים האחרונות, מעבדות וירולוגיות השתמשו בצורה הרחבה ביותר בשיטת תרבית תאים ורקמות, המאפשרת לבודד נגיפי אדנו, נגיפי הרפס, נגיפים סינציציאליים נשימתיים, מיקסוירוס ועוד, ולבצע אבחון אטיולוגי של המחלה כבר ב- השלבים הראשונים של המחקר. הבסיס לכך הוא התכונות הציטולוגיות שנחקרו היטב של האינטראקציה של רוב הנגיפים והתאים. כך, הדבקה של תאי HeLa, Hep-2 בחומר המכיל אדנו-וירוס מסוג 2 מביאה כבר ביום ה-3 לשינוי דפוס הגדילה של השכבה החד-שכבתית ולהופעת תאים טיפוסיים בצורת אשכולות ענבים וכו'. , המוגדרים היטב במיקרוסקופ האור הרגיל בהגדלה נמוכה.
חשיבות יוצאת דופן לאבחון האטיולוגי של מחלה זיהומית היא הסטנדרטיזציה של בידוד הנגיפים מחומר הבדיקה, אשר בשלב זה של העבודה כרוכה בשימוש בבעלי חיים ליניאריים טהורים מבחינה גנטית, תוך התחשבות במאפיינים הפנוטיפיים (בעיקר הגיל). זה נובע בעיקר מהעובדה שחיות ניסוי בקווים גנטיים שונים ומזדקנים מעלות משתנותרגישים לווירוסים. לפיכך, במהלך זיהום תוך-מוחי של עכברים עם זן WSN הנוירוטרופי של נגיף השפעת, קווים של BALB/c, A, CBA ובעלי חיים צאצאים הראו את הרגישות הגבוהה ביותר, אותו דפוס נקבע במקרים של מתן תוך-אף של חומר הבדיקה. משמעותי עבור תוצאות סופיותבעבודה על בידוד וירוסים יש בדיקה ראשונית של בעלי חיים, עוברי תרנגולות, תרביות תאים ורקמות עבור נשאי וירוסים סמויים. בשימוש נרחב מאוד במעבדה, עוברי עוף יכולים להיות נגועים בנגיפים של לוקמיה של עופות, אנצפלומיאליטיס של עופות, סינוסיטיס זיהומיות, פסיטאקוזיס, מחלת ניוקאסל, פתוגנים של כמה זיהומים חיידקיים (פארטיפוס וכו'), כמו גם מיקופלזמה. יותר יותרסוכני חיידקים ובעיקר ויראליים מסוגלים להדביק באופן ספונטני תרביות תאים ורקמות ולשרוד בהן. נוכחותם משפיעה באופן משמעותי על הערכת החומר הנלמד. סוגים מסוימים של מיקופלזמות בתרבית תאים
יכול לגרום להמגלוטינציה ולספיחה של המד ואף ליצור פלאקים מתחת לציפוי האגר, בדומה לוירוסים הנוצרים. חשיבות לא קטנה היא גם זיהום תרביות תאים מסוג אחד על ידי אחרים, לרוב זה קשור לתאי HeLa ונצפה כשעובדים עם סוגים שוניםתרבויות באותו חדר, עם עיבוד לקוי של כלי זכוכית מעבדה, וכו 'נוכחות של זיהום של תרביות תאים או זיהום של בעלי חיים עם סוכנים חיידקיים, ככלל, מתבטא די ברור (שינויים בדפוס הצמיחה של חד-שכבה של תאים, תכונות של מצע התרבות, מוות של עוברי תרנגולות או בעלי חיים עם תסמינים מסוימים וכו'. ד) ואינו מציג קשיים מיוחדים בהערכת התוצאות. המצב מסובך יותר עם צורות סמויות של זיהום, בהן נדרש שימוש בשיטות סרולוגיות ואחרות. הנחיות אלו צריכות להילקח בחשבון בעבודתו של וירולוג, במיוחד בעת ביצוע אבחון אטיולוגי של מקרים לא ברורים של המחלה.

האבחנה של דלקות מעיים חריפות נקבעת על בסיס נתונים קליניים ואפידמיולוגיים, עם אישור מעבדה חובה. ללא אישור מעבדה, האבחנה של זיהומי מעיים חריפים יכולה להתבצע רק במקרים בהם קיימים נתונים אפידמיולוגיים ברורים (במוקדי הזיהום ובמעבדה מפוענחים התפרצויות קבוצות של מחלות ברוב החולים).

לאבחון הסופי נעשה שימוש בשיטות מחקר בקטריולוגיות, וירולוגיות וסרולוגיות, לשיטה הקופרולוגית, כמו גם לתוצאות הסיגמואידוסקופיה (לשיגלוזיס), יש חשיבות משנית.

אני. שיטה בקטריולוגיתהוא בעל החשיבות הגדולה ביותר ב-AII הנגרמת על ידי פלורת חיידקים (שלשול פולשני ומפריש). התוצאות הטובות ביותר מתקבלות בזריעת צואה ישירות ליד מיטת המטופל, לפני קביעת הטיפול האנטיביוטי ועם מסירתה למעבדה בקטריולוגית בשעתיים הראשונות מרגע הדגימה. לצורך המחקר, יש צורך לבחור חלקיקים המכילים זיהומים פתולוגיים, אך לא דם. החומר הביולוגי נזרע על המדיה הסלקטיבית של פלוסקירב, לוין ואחרים. תדירות התוצאות החיוביות (חיסון הפתוגן וזיהויו), אפילו בנוכחות ביטויים קליניים אופייניים של AII. אינו עולה על 70-80%.

II. שיטות סרולוגיותאבחון, ככלל, משמש במקרים מפוקפקים ועם תוצאות שליליות של בדיקה בקטריולוגית של צואה. בילדי החודשים הראשונים החיים, זה לא אינפורמטיבי, אבל בכל המקרים, העלייה בטיטר הנוגדנים פי 4 או יותר חשובה. הם מבוצעים בשני כיוונים - קביעת הטיטר של נוגדנים ספציפיים בסרום הדם של המטופל והאנטיגן בצואה.

כדי לקבוע את הטיטר של נוגדנים ספציפיים, RNHA משמש בדרך כלל, לעתים רחוקות יותר RPHA או RA. כאנטיגנים, נלקח תרחיף של תרבית יומית של חיידקים (RA) או אבחון אריתרוציטים. ( RPGA, RNGA). אמין יותר צריך להיחשב לעלייה בטיטרים של נוגדנים בדינמיקה של המחלה. נוגדנים ספציפיים בדם של חולה עם AII מופיעים ביום ה-3-5 למחלה ועוברים למקסימום תוך 2-3 שבועות, ולאחר מכן יורדים בהדרגה. בילדים צעירים, במיוחד אלו עם רקע פרה-מורבידי שונה, נוגדנים ספציפיים בדם אינם מזוהים או בעלי טיטר נמוך (1:50 - 1:100).

בנוכחות תסמינים קליניים אופייניים וזיהוי של טיטר אבחנתי של נוגדנים ספציפיים (1:200) ומעלה עם האבחון המתאים), או עלייה בטיטר שלהם בדינמיקה של המחלה, האבחנה הקלינית של זיהום במעיים צריכה להיחשב מבוסס גם בהיעדר זריעה של הפתוגן מהצואה של המטופל.

III. שיטות לאבחון אקספרסדלקות מעיים מבוססות על זיהוי האנטיגן הפתוגן (חיידקים או וירוסים) מהצואה, עבורו משתמשים בשיטה הישירה של נוגדנים זוהרים (PMLA) או בשיטת אימונוספיחה - תגובת פחם (RCA). את התוצאה המוקדמת ניתן לקבל תוך 2-3 שעות, האחרונה ביום. הספציפיות של השיטה היא 82-94.6%.

בשנים האחרונות נעשה שימוש במבחן חיסוני ספוג אנזימים (ELISA) ו-Latex agglutination (RLA) לאבחון מהיר של שלשול.

פענוח אטיולוגי של שלשול ויראלי מתבצע בשיטות וירולוגיות ובקטריולוגיות.

התקופה האופטימלית לזיהוי וירוסים בצואה נחשבת בין 1 ל-4 ימים של מחלה, אם כי הפתוגן נמשך לעתים קרובות יותר.

השיטה העיקרית בה משתמשים היא שיטת מיקרוסקופ אלקטרונים, המאפשרת תכונות מורפולוגיותלזהות מגוון רחב של סוכנים ויראליים הגורמים לדלקת גסטרואנטריטיס.

כמו כן נעשה שימוש במיקרוסקופ אימונואלקטרון (בהתבסס על יכולתם של חלקיקים ויראליים בנוכחות סרה הומולוגית או סרה הבראהה ליצור אגרגטים של חלקיקי רוטה וירוסים עם אימונוגלובולינים.

בין שיטות הדיאגנוסטיקה של סרוד, המסורתיות כוללות את תגובת הנטרול, עיכוב ההמגלוטינציה, קיבוע משלים.עלייה של פי שניים עד פי ארבעה בנוגדנים בסמים זוגיים יש ערך רטרוספקטיבי לאבחון זיהום בנגיף הרוטה. ELISA, משקעים מפוזרים, צמיחת לטקס, תגובת קרישה משמשים לאיתור נגיפי רוטה או אנטיגנים שלהם.

בעבודה מעשית, ה-IFA תפס את המקום הרחב ביותר – בידוד של אנטיגנים של רוטה וירוס בקופרופילטרים. עדיף להשתמש בשיטות אלו בדינמיקה (היום הראשון לאשפוז ולאחר החלמה קלינית).

על מנת לשלול את האטיולוגיה החיידקית של AII, מחקר בקטריולוגי של צואה מתבצע גם על ידי חיסון על חומרי הזנה.

סיגמואידוסקופיההשיטה משמשת לעתים רחוקות בילדים, בעיקר כדי לקבוע את הגורם להפרשת חיידקים ממושכת ולאבחון צורות ממושכות וכרוניות של המחלה. שיטת בדיקה זו מאפשרת להעריך רק את אופי השינויים המורפולוגיים בקרומים הריריים. דיסטלימעי, אך לא ניתן להשתמש בו כדי לבצע אבחנה אטיולוגית של זיהום במעיים.

אינדיקציות לבדיקה אינסטרומנטלית (אולטרסאונד, בדיקת רנטגן של איברים חלל הבטן, FGS) עם AII הוא הצורך באבחנה מבדלת עם מחלות כירורגיות של איברי הבטן (אינוואגינציה, דלקת התוספתן), מחלות סומטיות (גסטריטיס, כיב פפטי, cholecystopancreatitis וכו') והפרעות תפקודיות של מערכת העיכול.

קביעת הצורה הקלינית של הרעילות (נוירוטוקסיקוזיס, toxicosis עם אקסיקוזיס, TSS), דרגתה (שלב), סוג ההתייבשות בשלשול זיהומי בילדים וטיפול חירום

שיטות מחקר וירולוגיות

שיטות לחקר הביולוגיה של וירוסים וזיהוים. בווירולוגיה, נעשה שימוש נרחב בשיטות של ביולוגיה מולקולרית, בעזרתן ניתן היה לקבוע את המבנה המולקולרי של חלקיקים ויראליים, כיצד הם חודרים לתא ואת תכונות הרבייה של וירוסים, המבנה הראשוני של חומצות גרעין ויראליות. וחלבונים. מפותחות שיטות לקביעת רצף המרכיבים המרכיבים של חומצות גרעין ויראליות וחומצות אמינו חלבוניות. ניתן לקשר את הפונקציות של חומצות גרעין והחלבונים המקודדים על ידן עם רצף הנוקלאוטידים ולבסס את הגורמים לתהליכים תוך תאיים שמשחקים תפקיד חשובבפתוגנזה של זיהום ויראלי.

בתרביות תאים נגועים ניתן לזהות על ידי שינוי במורפולוגיה של התא, פעולה ציטופטית, שעשויה להיות בעלת אופי ספציפי, הופעת תכלילים, על ידי קביעת אנטיגנים ויראליים בתא ובנוזל התרבית; קביעת התכונות הביולוגיות של צאצאים נגיפיים בנוזל תרבית וטיטרציה של וירוסים בתרבית רקמה, עוברי אפרוחים או בעלי חיים רגישים; על ידי זיהוי חומצות גרעין ויראליות בודדות בתאים על ידי הכלאה מולקולרית או אשכולות של חומצות גרעין בשיטה ציטוכימית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

בידוד וירוסים הוא תהליך מייגע וארוך. הוא מתבצע על מנת לקבוע את סוג הנגיף או הווריאציה של הנגיף המסתובב בקרב האוכלוסייה (לדוגמה, לזהות את הסרווריאנט של נגיף השפעת, זן הבר או החיסון של נגיף הפוליו וכו'); במקרים בהם יש צורך בביצוע צעדים אפידמיולוגיים דחופים; כאשר מופיעים סוגים או גרסאות חדשות של וירוסים; במידת הצורך, אשר את האבחנה המוקדמת; לאינדיקציה של וירוסים בחפצים סביבתיים. בעת בידוד וירוסים, נלקחת בחשבון האפשרות של התמדה שלהם בגוף האדם, כמו גם התרחשות של זיהום מעורב שנגרם על ידי שני וירוסים או יותר. אוכלוסייה הומוגנית מבחינה גנטית של וירוס המתקבלת מנגיף בודד נקראת שיבוט ויראלי, ותהליך השגתו נקרא שיבוט.

כדי לבודד וירוסים, חיות מעבדה רגישות, משתמשים בעוברי עוף, אך לרוב משתמשים בתרבית רקמה. נוכחות נגיף נקבעת בדרך כלל על ידי ניוון תאים ספציפי (אפקט ציטופטי), היווצרות סימפלסטים וסינסיטיות, זיהוי תכלילים תוך תאיים, וכן אנטיגן ספציפי שזוהה באמצעות אימונופלואורסצנטי, ספיחה המד, המאגלוטינציה (בנגיפים הממגלוטינים) וכו' . ניתן לזהות סימנים אלו רק לאחר 2-3 מעברים של הנגיף.

לבידוד של מספר וירוסים, כמו נגיפי שפעת, משתמשים בעוברי תרנגולת, לבידוד של כמה מנגיפי קוקסאקי ומספר נגיפים ארבו משתמשים בעכברים שזה עתה נולדו. זיהוי וירוסים מבודדים מתבצע באמצעות בדיקות סרולוגיות ושיטות אחרות.

כאשר עובדים עם וירוסים, הטיטר שלהם נקבע. טיטרציה של וירוסים מתבצעת בדרך כלל בתרבית רקמה, תוך קביעת הדילול הגבוה ביותר של הנוזל המכיל את הנגיף, שבו מתרחשות רקמות, ונוצרות רקמות ספציפיות לנגיפים. ניתן להשתמש בשיטת הפלאק לטיטרציה של מספר וירוסים. פלאקים, או מושבות שליליות של וירוסים, הם מוקדים של תאים שהושמדו וירוסים של תרבית רקמה חד-שכבתית תחת ציפוי אגר. ספירת מושבות מאפשרת לכמת את הפעילות המדבקת של וירוסים על בסיס שחלקיק וירוס מדבק אחד יוצר רובד אחד. לוחות מזוהים על ידי צביעה של התרבית עם צבעים חיוניים, בדרך כלל אדום ניטרלי; הפלאקים אינם סופחים את הצבע ולכן נראים ככתמים בהירים על רקע תאים חיים מוכתמים. מבוטא כמספר היחידות היוצרות פלאק ב-1 ml.

טיהור וריכוז של וירוסים מתבצע בדרך כלל על ידי אולטרה צנטריפוגה דיפרנציאלית ולאחריה צנטריפוגה בדרגות ריכוז או צפיפות. כדי לטהר וירוסים, נעשה שימוש בשיטות אימונולוגיות, כרומטוגרפיה של חילופי יונים, אימונוסורבנטים וכו'.

אבחון מעבדה של זיהומים ויראליים כולל איתור הפתוגן או מרכיביו בחומר קליני; וירוס מחומר זה; serodiagnosis. בחירת שיטת האבחון המעבדתית בכל מקרה לגופו תלויה באופי המחלה, בתקופת המחלה וביכולות המעבדה. זיהומים ויראליים מודרניים מבוססים על שיטות אקספרס המאפשרות לקבל תשובה מספר שעות לאחר נטילת החומר הקליני דייטים מוקדמיםלאחר המחלה, אלה כוללים אלקטרוניים וחיסוניים אלקטרוניים, כמו גם שיטת הכלאה מולקולרית, זיהוי נוגדנים מקבוצת lgM וכו '.

מיקרוסקופ אלקטרוני של וירוסים מוכתמים שלילי מאפשרת בידול של וירוסים וקביעת ריכוזם. השימוש במיקרוסקופ אלקטרוני באבחון זיהומים ויראליים מוגבל לאותם מקרים שבהם מספר החלקיקים הנגיפיים בחומר הקליני גבוה מספיק (10 5 ב-1 mlוגבוה יותר). החיסרון של השיטה הוא חוסר היכולת להבחין בין וירוסים השייכים לאותה קבוצה טקסונומית. חיסרון זה מתבטל על ידי שימוש במיקרוסקופיה אלקטרונית חיסונית. השיטה מבוססת על יצירת קומפלקסים חיסוניים כאשר מוסיפים סרום ספציפי לחלקיקים ויראליים, תוך כדי ריכוז בו-זמנית של חלקיקים ויראליים המאפשר לזהות אותם. השיטה משמשת גם לאיתור נוגדנים. לצורך אבחון אקספרס, מתבצעת בדיקה מיקרוסקופית אלקטרונית של תמציות רקמות, צואה, נוזלים, סודות מהאף. מיקרוסקופ אלקטרוני נמצא בשימוש נרחב כדי לחקור את המורפוגנזה של הנגיף; היכולות שלו מורחבות עם השימוש בנוגדנים מסומנים.

שיטת ההכלאה המולקולרית, המבוססת על זיהוי חומצות גרעין ספציפיות לווירוס, מאפשרת לזהות עותקים בודדים של גנים ואין לה אח ורע מבחינת הרגישות. מבוסס על הכלאה של גדילים משלימים או RNA (בדיקות) ויצירת מבנים דו-גדיליים. הבדיקה הזולה ביותר היא DNA רקומביננטי משובט. מסומן במבשרים רדיואקטיביים (בדרך כלל זרחן רדיואקטיבי). השימוש בתגובות קולורימטריות מבטיח. קיימות מספר אפשרויות להכלאה מולקולרית: הכלאה נקודתית, הכלאה כתם, הכלאה של סנדוויץ', באתרו וכו'.

נוגדנים מסוג lgM מופיעים מוקדם יותר מדרגת G (ביום ה-3-5 למחלה) ונעלמים לאחר מספר שבועות, כך שזיהוים מצביע על זיהום לאחרונה. נוגדנים מקבוצת IgM מתגלים על ידי אימונופלואורסצנטי או בדיקת אנזים אימונו באמצעות אנטי-μ אנטיסרה (סרת שרשרת כבדה נגד IgM).

שיטות סרולוגיות בווירולוגיה מבוססות על תגובות אימונולוגיות קלאסיות (ראה שיטות מחקר אימונולוגיות) : תגובות קיבוע משלים, עיכוב hemagglutination, נטרול ביולוגי, immunodiffusion, hemagglutination עקיף, המוליזה רדיאלית, immunofluorescence, immunoassay אנזים, radioimmunoassay. פותחו מיקרו-שיטות לתגובות רבות, והטכניקות שלהן משתפרות ללא הרף. שיטות אלו משמשות לזיהוי וירוסים באמצעות קבוצה של סרומים ידועים ועבור סרודאיגנוזיס על מנת לקבוע את העלייה בנוגדנים בסרום השני בהשוואה לראשון (הנסיוב הראשון נלקח בימים הראשונים לאחר המחלה, השני - לאחר 2-3 שבועות). ערך אבחון אינו פחות מעלייה של פי ארבע בנוגדנים בסרום השני. אם גילוי נוגדנים מקבוצת lgM מעיד על זיהום לאחרונה, אזי הנוגדנים מקבוצת lgC נמשכים מספר שנים, ולעיתים לכל החיים.

כדי לזהות אנטיגנים בודדים של וירוסים ונוגדנים אליהם בתערובות מורכבות ללא טיהור חלבון קודם, משתמשים באימונובלוטינג. השיטה משלבת חלוקת חלבונים באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד עם בדיקת אימונו של חלבונים לאחר מכן על ידי בדיקת אנזים אימונו. הפרדת החלבונים מפחיתה את הדרישות לטוהר הכימי של האנטיגן ומאפשרת לזהות זוגות בודדים - נוגדנים. משימה זו רלוונטית, למשל, ב-serodiagnosis של זיהום ב-HIV, כאשר תגובות חיוביות כוזבות של אנזים חיסוני נובעות מנוכחות של נוגדנים ל אנטיגנים של תאים, אשר קיימים כתוצאה מטיהור לא מספק של חלבונים ויראליים. נוגדנים בסרה של חולים לאנטיגנים ויראליים פנימיים וחיצוניים מאפשרים לך לקבוע את שלב המחלה, ובניתוח של אוכלוסיות - חלבונים ויראליים. אימונובלוטינג בזיהום ב-HIV משמש כבדיקת אישור לאיתור אנטיגנים ויראליים בודדים ונוגדנים אליהם. בעת ניתוח אוכלוסיות, השיטה משמשת לקביעת השונות של חלבונים ויראליים. הערך הרב של השיטה טמון באפשרות לנתח אנטיגנים המסונתזים בטכנולוגיית DNA רקומביננטי, ביסוס גודלם ונוכחותם של דטרמיננטים אנטיגנים.

בִּיבּלִיוֹגְרָפִיָה:בוקרינסקאיה א.ג. , מ., 1986; וירולוגיה, שיטות, עורך. ב' מיכי,. מאנגלית, מ', 1988; מדריך לשיטות מחקר מיקרוביולוגיות וויירולוגיות, עורך. M.O. בירגר, מ', 1982.

1. אנציקלופדיה רפואית קטנה. - M.: אנציקלופדיה רפואית. 1991-96 2. ראשית בריאות. - מ.: האנציקלופדיה הרוסית הגדולה. 1994 3. מילון אנציקלופדי תנאים רפואיים. - מ.: האנציקלופדיה הסובייטית. - 1982-1984.

ראה מהן "שיטות מחקר וירולוגיות" במילונים אחרים:

הם שואפים לזהות וירוסים, זיהוים (זיהוי) וחקר תכונות ביולוגיות. כדי לבודד וירוסים (ראה וירוסים) מבני אדם, בעלי חיים וצמחים, חומר הבדיקה מוכנס לגופם של הרגישים לנגיפים ... ... האנציקלופדיה הסובייטית הגדולה

מחקרים וירולוגיים- מחקרים וירולוגיים, מכלול שיטות מחקר המאפשרות לזהות את האטיולוגיה מחלה נגיפיתולחקור את הפתוגן שלו.השלבים העיקריים של V. ו. הם הבידוד של הנגיף מחיות חולות ומתות (לקחה, שימורים... מילון אנציקלופדי וטרינרי

מחקר מעבדה- מחקר מעבדה. ראה מחקרים במעבדה. התנאי הכי חשובהשגת תוצאות מחקר אמינות היא בחירה נכונהאובייקטי ניתוח, בחירתם בזמן וניסוח בעיית המחקר. כללי דגימה... מחלות דגים: מדריך

מוסדות בריאות או יחידות מבניותמוסדות טיפול ומניעתי או סניטריים מונעים המיועדים לביצוע שונות מחקר רפואי. קבוצה זו אינה כוללת מדעי ... ... אנציקלופדיה רפואית

I אפידמיולוגיה (מגיפה + דוקטרינת לוגו יוונית) היא מדע החוקר את דפוסי תהליך המגיפה ומפתח אמצעים למלחמה במחלות אנושיות זיהומיות. מבחינה היסטורית, א' התפתח כדיסציפלינה מדעית, שמושא המחקר שלה ... ... אנציקלופדיה רפואית

I Virology (וירוס [s] (וירוסים) + דוקטרינת לוגו יוונית) הוא מדע ביו-רפואי החוקר וירוסים. היא התעוררה בסוף המאה ה-19, כאשר המדען הרוסי D.I. איבנובסקי (1892) ביסס לראשונה את קיומם של המיקרואורגניזמים הקטנים ביותר שגורמים ל ... ... אנציקלופדיה רפואית

- (מילים נרדפות: אנצפלומיאליטיס בקרציות, דלקת מוח אביבית-קיץ, דלקת קרום המוח באביב-קיץ, דלקת מוח טייגה, דלקת מוח במזרח הרחוק הרוסי) מחלה מדבקת, מאופיין בחום, שיכרון ונגע דומיננטי ... ... אנציקלופדיה רפואית

שיטות מחקר וירולוגיות

שיטות לחקר הביולוגיה של וירוסים וזיהוים. בווירולוגיה, נעשה שימוש נרחב בשיטות של ביולוגיה מולקולרית, בעזרתן ניתן היה לקבוע את המבנה המולקולרי של חלקיקים ויראליים, כיצד הם חודרים לתא ואת תכונות הרבייה של וירוסים, המבנה הראשוני של חומצות גרעין ויראליות. וחלבונים. מפותחות שיטות לקביעת רצף המרכיבים המרכיבים של חומצות גרעין ויראליות וחומצות אמינו חלבוניות. ניתן לקשר בין הפונקציות של חומצות הגרעין והחלבונים המקודדים על ידן עם רצף הנוקלאוטידים ולבסס את הגורמים לתהליכים תוך תאיים הממלאים תפקיד חשוב בפתוגנזה של זיהום ויראלי.

בתרביות תאים נגועים ניתן לזהות וירוסים על ידי שינוי במורפולוגיה של התא, פעולה ציטופטית, שעשויה להיות ספציפית, הופעת תכלילים, על ידי קביעת אנטיגנים ויראליים בתא ובנוזל התרבית; קביעת התכונות הביולוגיות של צאצאים נגיפיים בנוזל תרבית וטיטרציה של וירוסים בתרבית רקמה, עוברי אפרוחים או בעלי חיים רגישים; על ידי זיהוי חומצות גרעין ויראליות בודדות בתאים על ידי הכלאה מולקולרית או אשכולות של חומצות גרעין בשיטה ציטוכימית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

כדי לבודד וירוסים, זיהום של חיות מעבדה רגישות, עוברי עוף משמש, אך לרוב נעשה שימוש בתרבית רקמה. נוכחות נגיף נקבעת בדרך כלל על ידי ניוון תאים ספציפי (אפקט ציטופטי), היווצרות סימפלסטים וסינסיטיות, זיהוי תכלילים תוך תאיים, וכן אנטיגן ספציפי שזוהה באמצעות אימונופלואורסצנטי, ספיחה המד, המאגלוטינציה (בנגיפים הממגלוטינים) וכו' . ניתן לזהות סימנים אלו רק לאחר 2-3 מעברים של הנגיף.

כאשר עובדים עם וירוסים, הטיטר שלהם נקבע. טיטרציה של וירוסים מתבצעת בדרך כלל בתרבית רקמה, תוך קביעת הדילול הגבוה ביותר של הנוזל המכיל את הנגיף, שבו מתרחשת ניוון רקמות, נוצרים תכלילים ואנטיגנים ספציפיים לווירוס. ניתן להשתמש בשיטת הפלאק לטיטרציה של מספר וירוסים. פלאקים, או מושבות שליליות של וירוסים, הם מוקדים של תאים שהושמדו וירוסים של תרבית רקמה חד-שכבתית תחת ציפוי אגר. ספירת מושבות מאפשרת ניתוח כמותי של הפעילות המדבקת של וירוסים על בסיס שחלקיק וירוס מדבק אחד יוצר רובד אחד. לוחות מזוהים על ידי צביעה של התרבית עם צבעים חיוניים, בדרך כלל אדום ניטרלי; הפלאקים אינם סופחים את הצבע ולכן נראים ככתמים בהירים על רקע תאים חיים מוכתמים. הטיטר של הנגיף מבוטא כמספר היחידות היוצרות פלאק ב-1 ml.

אבחון מעבדה של זיהומים ויראליים כולל איתור הפתוגן או מרכיביו בחומר קליני; בידוד וירוסים מחומר זה; serodiagnosis. בחירת שיטת האבחון המעבדתית בכל מקרה לגופו תלויה באופי המחלה, בתקופת המחלה וביכולות המעבדה. אבחון מודרני של זיהומים ויראליים מבוסס על שיטות אקספרס המאפשרות לקבל מענה מספר שעות לאחר נטילת חומר קליני בשלבים המוקדמים שלאחר המחלה, אלה כוללים מיקרוסקופ אלקטרונים ואלקטרונים חיסוניים וכן אימונופלואורסצנטי, שיטת הכלאה מולקולרית , זיהוי נוגדנים מקבוצת lgM וכו'.

מיקרוסקופ אלקטרוני של וירוסים מוכתמים שלילי מאפשרת בידול של וירוסים וקביעת ריכוזם. השימוש במיקרוסקופ אלקטרוני באבחון זיהומים ויראליים מוגבל לאותם מקרים שבהם ריכוז החלקיקים הנגיפיים בחומר הקליני גבוה מספיק (10 5 ב-1 mlוגבוה יותר). החיסרון של השיטה הוא חוסר היכולת להבחין בין וירוסים השייכים לאותה קבוצה טקסונומית. חיסרון זה מתבטל על ידי שימוש במיקרוסקופיה אלקטרונית חיסונית. השיטה מבוססת על יצירת קומפלקסים חיסוניים כאשר מוסיפים סרום ספציפי לחלקיקים ויראליים, תוך כדי ריכוז בו-זמנית של חלקיקים ויראליים המאפשר לזהות אותם. השיטה משמשת גם לאיתור נוגדנים. לצורך אבחון אקספרס, מתבצעת בדיקה אלקטרונית מיקרוסקופית של תמציות רקמות, צואה, נוזל שלפוחית, הפרשות מהאף. מיקרוסקופ אלקטרוני נמצא בשימוש נרחב כדי לחקור את המורפוגנזה של הנגיף; היכולות שלו מורחבות עם השימוש בנוגדנים מסומנים.

שיטת ההכלאה המולקולרית, המבוססת על זיהוי חומצות גרעין ספציפיות לווירוס, מאפשרת לזהות עותקים בודדים של גנים ואין לה אח ורע מבחינת הרגישות. התגובה מבוססת על הכלאה של גדילים משלימים של DNA או RNA (בדיקות) ויצירת מבנים דו-גדיליים. הבדיקה הזולה ביותר היא DNA רקומביננטי משובט. הבדיקה מסומנת במבשרים רדיואקטיביים (בדרך כלל זרחן רדיואקטיבי). השימוש בתגובות קולורימטריות מבטיח. ישנן מספר וריאנטים של הכלאה מולקולרית: הכלאה נקודתית, הכלאה כתם, הכלאה של סנדוויץ', הכלאה באתרו וכו'.

נוגדנים מקבוצת lgM מופיעים מוקדם יותר מנוגדנים מסוג G (ביום ה-3-5 למחלה) ונעלמים לאחר מספר שבועות, כך שזיהוים מצביע על זיהום לאחרונה. נוגדנים מקבוצת IgM מתגלים על ידי אימונופלואורסצנטי או בדיקת אנזים אימונו באמצעות אנטי-μ אנטיסרה (סרת שרשרת כבדה נגד IgM).

כדי לזהות אנטיגנים בודדים של וירוסים ונוגדנים אליהם בתערובות מורכבות ללא טיהור חלבון קודם, משתמשים באימונובלוטינג. השיטה משלבת חלוקת חלבונים באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד עם בדיקת אימונו של חלבונים לאחר מכן על ידי בדיקת אנזים אימונו. הפרדת החלבונים מפחיתה את הדרישות לטוהר הכימי של האנטיגן ומאפשרת לזהות זוגות אנטיגן-נוגדנים בודדים. משימה זו רלוונטית, למשל, ב-serodiagnosis של זיהום ב-HIV, כאשר תגובות חיוביות כוזבות של אנזים חיסוני נובעות מנוכחות של נוגדנים לאנטיגנים של תאים, הקיימים כתוצאה מטיהור לא מספק של חלבונים ויראליים. זיהוי נוגדנים בסרה של חולים לאנטיגנים ויראליים פנימיים וחיצוניים מאפשר לקבוע את שלב המחלה, ובניתוח אוכלוסיות - השונות של חלבונים ויראליים. אימונובלוטינג בזיהום ב-HIV משמש כבדיקת אישור לאיתור אנטיגנים ויראליים בודדים ונוגדנים אליהם. בעת ניתוח אוכלוסיות, השיטה משמשת לקביעת השונות של חלבונים ויראליים. הערך הרב של השיטה טמון באפשרות לנתח אנטיגנים המסונתזים בטכנולוגיית DNA רקומביננטי, ביסוס גודלם ונוכחותם של דטרמיננטים אנטיגנים.

בִּיבּלִיוֹגְרָפִיָה:בוקרינסקאיה א.ג. Virology, M., 1986; וירולוגיה, שיטות, עורך. ב' מיכי, טרנס. מאנגלית, מ', 1988; מדריך לשיטות מחקר מיקרוביולוגיות וויירולוגיות, עורך. M.O. בירגר, מ', 1982.

1. אנציקלופדיה רפואית קטנה. - מ.: אנציקלופדיה רפואית. 1991-96 2. עזרה ראשונה. - מ.: האנציקלופדיה הרוסית הגדולה. 1994 3. מילון אנציקלופדי למונחים רפואיים. - מ.: האנציקלופדיה הסובייטית. - 1982-1984.

וירמיה
וירולוגיה

ראה מהן "שיטות מחקר וירולוגיות" במילונים אחרים:

מחקר וירולוגי- מטרתן לזהות וירוסים, זיהוים (זיהוי) וחקר תכונות ביולוגיות. כדי לבודד וירוסים (ראה וירוסים) מבני אדם, בעלי חיים וצמחים, חומר הבדיקה מוכנס לגופם של הרגישים לנגיפים ... ... האנציקלופדיה הסובייטית הגדולה

מחקרים וירולוגיים- מחקרים וירולוגיים, מכלול שיטות מחקר המאפשרות לזהות את האטיולוגיה של מחלה ויראלית ולחקור את הפתוגן שלה.השלבים העיקריים של V. ו. הם הבידוד של הנגיף מחיות חולות ומתות (לקחה, שימורים... מילון אנציקלופדי וטרינרי

מחקר מעבדה- מחקר מעבדה. ראה מחקרים במעבדה. התנאי החשוב ביותר להשגת תוצאות מחקר אמינות הוא בחירה נכונה של אובייקטי ניתוח, בחירתם בזמן וניסוח בעיית המחקר. כללי דגימה... מחלות דגים: מדריך

מעבדות רפואיות- מוסדות של מערכת הבריאות או יחידות מבניות של מוסדות רפואיים ומניעה או סניטריים המיועדים למחקרים רפואיים שונים. קבוצה זו אינה כוללת מדעי ... ... אנציקלופדיה רפואית

אֶפִּידֶמִיוֹלוֹגִיָה- I Epidemiology (דוקטרינת אפידמיה + לוגו יוונית) היא מדע החוקר את דפוסי תהליך המגיפה ומפתח אמצעים למלחמה במחלות אנושיות מדבקות. מבחינה היסטורית, א' התפתח כדיסציפלינה מדעית, שמושא המחקר שלה ... ... אנציקלופדיה רפואית

וירולוגיה- I Virology (וירוס [s] (וירוסים) + דוקטרינת לוגו יוונית) מדע ביו-רפואי החוקר וירוסים. היא קמה בסוף המאה ה-19, כאשר המדען הרוסי D.I. איבנובסקי (1892) ביסס לראשונה את קיומם של המיקרואורגניזמים הקטנים ביותר שגורמים ל ... ... אנציקלופדיה רפואית

דלקת מוח קרציות- (מילים נרדפות: אנצפלומיאליטיס בקרציות, דלקת מוח אביבית-קיץ, דלקת קרום המוח באביב-קיץ, דלקת מוח טייגה, דלקת מוח במזרח הרחוק הרוסי) מחלה זיהומית המאופיינת בחום, שיכרון ונגע עיקרי ... ... אנציקלופדיה רפואית