OKB הוא הסמכה בינלאומית והם כלולים ב קבוצה גדולה BGKP (חיידקים מקבוצת Escherichia coli). ניתן לקבוע את תכולת OKB במים בשתי שיטות: שיטת מסנני ממברנה ושיטת טיטרציה (תסיסה).
חקירת מים בשיטת מסנני ממברנה. השיטה מבוססת על סינון נפח מים מוגדר באמצעות מסנני ממברנה, גידול יבולים על מצע אבחון דיפרנציאלי וזיהוי לאחר מכן של מושבות לפי מאפיינים תרבותיים וביוכימיים.
שיטת טיטרציה לחקר המים. השיטה מבוססת על הצטברות חיידקים לאחר חיסון של נפח מים מוגדר לתוך מצע הזנה נוזלי, ולאחר מכן חיסון מחדש על מצע אבחון דיפרנציאלי וזיהוי מושבות על ידי בדיקות תרבותיות וביוכימיות.
"אורגניזמים קוליפורמיים" שייכים לסוג של חיידקים גרם שליליים בצורת מוט שחיים ומתרבים ב החלק התחתוןמערכת העיכול של בני אדם ובעלי חיים רבים בעלי דם חם כגון בעלי חיים ועופות מים, המסוגלים לתסיס לקטוז בטמפרטורה של 35-37 0C עם היווצרות חומצה, גז ואלדהיד. כשהם נמצאים במים עם שפכי צואה, הם מסוגלים לשרוד מספר שבועות, אם כי לרובם המוחלט אין יכולת להתרבות.
לפי מחקר שנים האחרונותיחד עם החיידקים Escherichia (E.Coli), Citrobacter, Enterobacter ו-Klebsiela המוזכרים בדרך כלל לקבוצה זו, חיידקי הלקטוז התסיסה Enterobacter cloasae ו-Citrobadter freundii שייכים גם הם לקבוצה זו. חיידקים אלה יכולים להימצא לא רק בצואה, אלא גם ב סביבה, ואפילו ב מי שתייהעם ריכוז גבוה יחסית של חומרים מזינים. בנוסף, זה כולל מינים שנמצאים רק לעתים נדירות או לא נמצאים בצואה ומסוגלים להתרבות במים באיכות טובה למדי.
TKB - חיידקי קוליפורמים תרמו סובלניים. מספר ה-TCB מאפיין את מידת הזיהום הצואה של המים במקווי מים וקובע בעקיפין את סכנת המגיפה ביחס לפתוגנים. דלקות מעיים. TKB נקבע באותן שיטות כמו BGKP (OKB).
הדגימה למחקרים סניטריים ומיקרוביולוגיים צריכה להתבצע בהתאם לכללי הסטריליות ולכל התנאים הדרושים המוסדרים עבור כל אובייקט הנבדק על ידי המסמכים הרגולטוריים הרלוונטיים.
טעויות דגימה מובילות לתוצאות שגויות. בעת אריזה והובלה של דגימות, יש צורך ליצור תנאים שאינם כוללים מוות או רבייה של המיקרוביוטה המקורית באובייקט הנחקר. לכן, יש להעביר את הדגימות שנאספו למעבדה לניתוח בהקדם האפשרי.
שיטת טיטרציה
השיטה מבוססת על הצטברות חיידקים לאחר חיסון של כמויות מסוימות של מים במצע תזונתי נוזלי, ולאחר מכן חיסון מחדש על מדיום צפוף דיפרנציאלי עם לקטוז וזיהוי מושבות על ידי בדיקות תרבותיות וביוכימיות. בחקר מי השתייה בשיטה איכותית נזרעים שלושה נפחים של 100 סמ"ק. בחקר מים עם מטרה | קְבִיעַת כָּמוּת OKB ו-TKB ( ניתוח מחדש) נזרעים, בהתאמה, 1.10 ו-100 סמ"ק - שלושה כרכים מכל סדרה.
חיסונים של 10 ו-100 סמ"ק מים מתבצעים, בהתאמה, ב-1 ו-10 סמ"ק ממדיום ההצטברות - LPS מרוכז ללא מחוון. זריעה של 1 cm3 מהדגימה מתבצעת ב-10 cm3 של LPS בריכוז הרגיל. החיסונים מודגרים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות. לאחר 24 שעות מתבצעת הערכה ראשונית של החיסונים במצע הצבירה. מהמיכלים, בהם מציינים נוכחות של גידול (עכירות) והיווצרות גז, זורעים החומר עם לולאה בקטריולוגית על מגזרי המדיום האנדו כדי להשיג מושבות מבודדות. מיכלים ללא סימנים נראים של גדילה והיווצרות גזים נשארים בתרמוסטט למשך עד 48 שעות ומוצגים שוב לצורך הערכה סופית.
התוצאות של יבולים ללא סימני צמיחה נחשבות שליליות, והן אינן כפופות למחקר נוסף. ממיכלים שבהם מצוינת עכירות, זריעה מתבצעת על סקטורים של מדיום האנדו. חיסונים על מדיום אנדו מודגרים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 18-20 שעות. אם מופיעה עכירות, נוצר גז במצע ההצטברות וצמיחה על מדיום אנדו של מושבות אופייניות לחיידקים חיוביים ללקטוז: אדום כהה או אדום, עם או ללא ברק מתכתי, קמור עם מרכז אדום והטבעה עליו מדיום התרבות, תנו מסקנה חיובית לגבי נוכחות OKB בנפח דגימה נתון.
יש לאשר את נוכחותו של ה-OKB במקרים הבאים:
ü רק עכירות נרשמה בתווך ההצטברות;
ü השתייכות למושבות חיוביות ללקטוז מוטלת בספק.
כדי לאשר את נוכחות ה-OKB, בצע את השלבים הבאים:
1. בדוק אם יש טביעה על מדיום האנדו לאחר הסרת המושבה החשודה באמצעות לולאה;
2. לבצע בדיקת אוקסידאז;
3. המחאה השייכת לקבוצת גרם;
4. אשר את היכולת להיווצרות גזים על ידי חיסון של 1-2 מושבות מבודדות מכל הסוגים מכל מגזר לתוך המדיום לאישור (LPS עם מחוון) ולאחר מכן דגירה של החיסונים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24-48 שעות.
בהיעדר מושבות מבודדות, הנפה על המדיום של אנדו מתבצעת בשיטות קונבנציונליות. חוות דעת שלילית ניתנת אם:
ü אין סימני צמיחה בסביבת הצבירה;
ü אין צמיחה במגזרים של סביבת האנדו;
ü מושבות לא אופייניות לחיידקים קוליפורמיים (שקופים, עם קצוות משוננים, מעורפלים) צמחו על מגזרי המדיום האנדו;
ü כל המושבות היו חיוביות לאוקסידאז;
כל המושבות היו גרם חיוביות;
ü בבדיקת האישור על מדיום LPS עם המחוון, לא נצפתה היווצרות גז.
כדי לקבוע את ה-TCB, עבדו עם סקטורים של מדיום האנדו שבהם צמחו מושבות לקטוז אופייניות. שתיים או שלוש מושבות מבודדות מכל סוג מכל מגזר מחוסנות למבחנות עם כל אחד מאמצעי הצטברות הלקטוז, מודגרות בטמפרטורה של 44 מעלות צלזיוס למשך יום. עם היווצרות גזים במצע הצטברות הלקטוז, צמיחת חיידקים חיוביים ללקטוז על מדיום האנדו, וזיהוי יכולת התסיסה של לקטוז לחומצה וגז במדיום לקטוז לאשר בטמפרטורה של 44 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. , ניתנת מסקנה חיובית לגבי נוכחות TKB בנפח זה של מים. במחקר איכותני (כאשר בוחנים שלושה נפחים של 100 סמ"ק כל אחד, כאשר מתגלים OKB ו-TKB, לפחות באחד משלושת הכרכים, נרשם הערך הבא: "OKB ו-TBC נמצאו ב-100 סמ"ק".
במחקר בשיטה כמותית נקבעים NVCh, OKB ו-TKB לפי טבלאות מיוחדות. אם תוצאות המחקר להימצאות OKB ו-TKB בכל הנפחים שנבדקו שליליות, יוצאת מסקנה: "לא נמצאו OKB ו-TKB ב-100 סמ"ק".
מים הם בית גידול טבעי למגוון מיקרואורגניזמים ( סוגים שוניםחיידקים, פטריות, פרוטוזואה ואצות). המכלול של כולם אורגניזמים מימייםשקוראים לו פלנקטון מיקרוביאלי. ההרכב הכמותי של המיקרופלורה מושפע בעיקר ממקור המים - משטח טרי (מים זורמים של נהרות, נחלים; ואגמים עומדים, בריכות, מאגרי מים), תת-קרקעיים (קרקע, קרקע, ארטזיות), מים אטמוספריים ומלוחים. על פי אופי השימוש, מובחנים מי שתייה (אספקת מים מרכזית ומקומית), מי בריכות שחייה, קרח רפואי וקרח ביתי. תשומת - לב מיוחדתדורשים ביוב.
המיקרופלורה של גופי מים נוצרת על ידי שתי קבוצות:
אוטוכטוני (או מימי) ו
מיקרואורגניזמים אלוכטוניים (נופלים מבחוץ עם זיהום ממקורות שונים).
1. מיקרופלורה אוטוכטונית - קבוצה של מיקרואורגניזמים שחיים ומתרבים כל הזמן במים. ככלל, המיקרופלורה של המים דומה להרכב המיקרוביאלי של הקרקע שאיתה באים המים במגע. הוא מורכב ממיקרוקוקים, סרקינים, מינים מסוימים פרוטאוסו לפטוספירה.מאנאירובים - Bacillus cereusוכמה סוגים של קלוסטרידיה. למיקרואורגניזמים אלו תפקיד משמעותי במחזור החומרים, פירוק פסולת אורגנית, סיבים וכו'.
2. זיהום ביולוגי של גופי מים.
עם מי ביוב, סערה, מי נמס, סוגים רבים של מיקרואורגניזמים נכנסים למאגרים, ומשנים באופן דרמטי את הביוקנוזה המיקרוביאלית. הנתיב העיקרי של זיהום מיקרוביאלי הוא כניסת פסולת עירונית וביוב לא מטופלים. כמו כן - כאשר רוחצים אנשים, בעלי חיים, כביסה בגדים, וכו 'נציגים של מיקרופלורה אנושית רגילה, UP, פתוגניים (סוכנים סיבתיים של דלקות מעיים, לפטוספירוזיס, yersiniosis, וירוסי פוליו, הפטיטיס A, וכו ') יכולים להיכנס למים. יש לזכור כי מים אינם סביבה נוחה להתרבות של מיקרואורגניזמים פתוגניים, שעבורם האורגניזמים האנושיים או החיות הם ביוטופים.
טיהור עצמי של מאגרים
שחרור ממיקרואורגניזמים מזהמים נצפה לאחר זיהום אורגני של גופי מים עקב הפעלה תחרותית של מיקרופלורה ספרופיטית, מה שמוביל לפירוק מהיר של חומרים אורגניים, ירידה במספר החיידקים, במיוחד "צואתיים". קיים מונח "ספרוביות" - (sapros - רקוב, יווני) מציין קומפלקס של תכונות של מאגר, כולל הרכב ומספר המיקרואורגניזמים במים המכילים חומרים אורגניים ואי-אורגניים בריכוזים מסוימים. תהליכי הטיהור העצמי של מים במאגרים מתרחשים ברצף וברציפות. ישנם אזורים polysaprobic, mesasprobic ו-oligosaprobic.
אזורים פוליספרוביים- אזורים מזוהמים מאוד. הם מכילים כמות גדולה של חומר אורגני וכמעט נטולי חמצן. מספר החיידקים ב-1 מ"ל מים באזור הפוליסאפרובי מגיע למיליון או יותר.
אזורים מסאסאפרוביים- אזורים של זיהום בינוני. מספר המיקרואורגניזמים הוא מאות אלפים ב-1 מ"ל.
אזורים אוליגוסאוביים- אזורים מים נקיים. הם מאופיינים בתהליך ניקוי עצמי שהושלם. מספר החיידקים הוא בין 10 ל-1000 ב-1 מ"ל מים.
לכן, מיקרואורגניזמים פתוגנייםהנכנסים לגוף המים מצויים בשפע באזורים הפוליסאפרוביים, מתים בהדרגה באזורי המזוזה פרוביים, ולמעשה אינם נמצאים באזורים האוליגוזפרוביים.
במחקר סניטרי ומיקרוביולוגי של מים, מבודדים OKB, enterococci, staphylococci ומיקרואורגניזמים פתוגניים (סלמונלה, כולרה ויבריוס, לפטוספירה, שיגלה וכו'). כל המחקרים הסניטריים והמיקרוביולוגיים של מים מוסדרים על ידי GOST הרלוונטי.
עילות למחקר סניטרי ומיקרוביולוגי של מים:
- בחירת מקור לאספקת מים מרכזית ובקרה עליו;
- ניטור יעילות חיטוי מי השתייה של אספקת מים מרכזית;
- ניטור מקורות אספקת מים תת-קרקעיים (בארות ארטזיות, מי אדמה וכו');
- ניטור מקורות השימוש הפרטני במים (בארות, מעיינות וכו');
- ניטור מצבם הסניטרי והאפידמיולוגי של המים במאגרים פתוחים;
- ניטור יעילות חיטוי המים בבריכות שחייה;
- בדיקת איכות הטיפול והחיטוי בשפכים;
- חקירת התפרצויות מים של מחלות זיהומיות.
ניתוח סניטרי ומיקרוביולוגי של מי שתייה
כרגע מוסדר הנחיות MUK 4.2.1018-01.
1. הגדרה של MCH – מספר כוללמיקרואורגניזמים אירוביים מזופילים ואנאירוביים פקולטטיביים המסוגלים ליצור מושבות על אגר מזין בטמפרטורה של t 0 37 0C למשך 24 שעות.
מכל דגימה, לפחות שני נפחים של 1 מ"ל מחוסנים ל-2 צלחות פטרי של 1 מ"ל מים + 8-12 מ"ל של אגר תזונתי מותך מקורר (45-49 0 C), מעורבב, מותר להתמצק, מכניס לתרמוסטט 37 0 C, 24 שעות. לאחר מכן סופרים את כל המושבות שגדלו על גביע בהגדלה של פי 2 (אך לא יותר מ-300 מושבות על גביע). מספר המושבות על הכלים מסוכם ומחלק ב-2 - התוצאה מבוטאת ב-CFU לכל 1 מ"ל מים. מותר עד 50 CFU לכל 1 מ"ל מים.
- קביעת חיידקי קוליפורמים נפוצים ותרמו-סובלנייםשיטת סינון ממברנה (שיטה עיקרית).
חיידקי קוליפורם נפוצים - OKB -מוטות גרם, אוקסידאז, שאינם יוצרים נבגים המסוגלים לגדול על מדיית לקטוז דיפרנציאלית, לתסיס לקטוז ל-KG ב-t 0 37 0 C למשך 24 שעות.
חיידקי קוליפורמים תרמו-סבילים - TKB -הם בין OKB, יש את כל התכונות שלהם, בנוסף, הם מסוגלים לתסוס לקטוז ל-CG ב-t 0 44 0 C למשך 24 שעות.
השיטה מבוססת על סינון נפח קבוע של מים באמצעות מסנני ממברנה, גידול יבולים על מצע הזנה דיפרנציאלי עם לקטוז, וזיהוי לאחר מכן של מושבות לפי מאפיינים תרבותיים וביוכימיים.
נתחו 3 נפחים של 100 מ"ל, ניתן לפצל את הנפחים (10, 40, 100, 150 מ"ל). נפח המים הנמדד מסונן באמצעות מסנני ממברנה. מסננים מונחים על המדיום של Endo (עד שלושה מסננים לכל כוס) ומודגרים בטמפרטורה של t 0 37 0 C למשך 24 שעות.
אם אין צמיחה - תוצאה שלילית - לא זוהו OKB ו-TKB. אם יש מושבות חיוביות ללקטוז אופייניות עליהן חותם צד הפוךמסננים, סופרים, מאשרים את השתייכותם ל-OKB ו-TKB. בשביל זה, מחקר
פעילות אוקסידאז
השתייכות לחיידקים גרם שליליים
תסיסה של לקטוז ל-CG (בשתי מבחנות - ב-t 0 37 0 С ו-44 0 С).
התוצאה מחושבת לפי הנוסחה Х=а∙100/V, שבו
a הוא מספר המושבות (בסך הכל),
V הוא נפח המים (בסך הכל),
X הוא מספר המושבות ב-100 מ"ל מים.
התוצאה מבוטאת ב-CFU OKB (TKB) ב-100 מ"ל מים. בדרך כלל, אין לקבוע OKB (TKB) ב-100 מ"ל של מי שתייה.
גם להגדיר
נבגים של קלוסטרידיה מפחיתי סולפיט- חיידקים בצורת מוט אנאירוביים היוצרים נבגים המפחיתים נתרן סולפיט על אגר ברזל-סולפיט ב-t 0 44 0 C למשך 16-18 שעות. השיטה מבוססת על גידול גידולים באגר ברזל סולפיט בתנאים קרובים לאנאירובי וספירת מספר המושבות השחורות.
נפח מים של 20 מ"ל מחומם באמבט מים ב-75-80 0 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות כדי לחסל צורות וגטטיביות, לאחר מכן מסונן דרך מסנן חיידקים, אשר מונח במבחנה עם אגר ברזל-סולפיט מותך (70-80 0 C), מקורר, מונח בתרמוסטט t 0 44 0 C למשך 16-18 שעות.
הגדרה של קוליפאג'ים.
קוליפאג'ים הם וירוסים חיידקיים המסוגלים להתיז אי - קוליויוצרים ב-t 0 37 0 C לאחר 18-20 שעות אזורי תמוגה של מדשאת החיידקים (פלאקים) על אגר מזין. מספר הלוחות לא נספר - הניתוח הוא איכותי.
לימוד מי שפכיםמוסדר MU 2.1.5.800 - 99 "ארגון הפיקוח התברואתי והאפידמיולוגי הממלכתי לחיטוי שפכים", 1999 חיסון ישיר מוחל על 4 כוסות עם אנדו מדיום, 0.5 מ"ל כל אחת (2 מ"ל - כל הנפח). לאחר מכן נספר מספר CFU OKB ו-TKB, מחושב מחדש עבור 100 מ"ל מים.
מי בריכהנחקר על פי הכללים והתקנים הסניטריים והאפידמיולוגיים - SanPiN 2.1.2.1188-03. IN 100 מ"ל מי בריכהלא יותר מ-1 CFU OKB מותר, TKB, coliphages, Staphylococcus aureus, גורמים סיבתיים של דלקות מעיים, Pseudomonas aeruginosa. בקרת מעבדה עבור האינדיקטורים המיקרוביולוגיים העיקריים (OKB, TKB, coliphages ו Staphylococcus aureus) מתבצעת 2 פעמים בחודש. מחקרים על נוכחות פתוגנים של דלקות מעיים מבוצעים במצב מגיפה לא חיובי.
כאשר מופיעים מקרים ספורדיים של דלקת ריאות של אטיולוגיה לא ברורה או התפרצויות מגיפה מחוץ לעונה של זיהומים חריפים בדרכי הנשימה בקרב מבקרים בבריכה, המים נבדקים לנוכחות לגיונלה ( לגיונלה פנאומופיליה), המועדפים על ידי מים חמים ונתזים. בזמן הנשימה, תרסיס עדין המכיל לגיונלה נכנס לריאות, מה שעלול לגרום ל"מחלת הלגיונרים" או לקדחת פונטיאק.
יישום מס' 2
ל-SanPiN 2.1.2.1188-03
מחלות בעלות אופי מדבק,
שניתן להעביר דרך בריכות שחייה
| מחלות | מידת החיבור עם גורם המים |
| 1. קדחת לוע-לחמית אדנו-ויראלית | +++ |
| 2. אפידרמופיטוזיס ("גרדת שחיין") | +++ |
| 3. צהבת נגיפית A | ++ |
| 4. זיהום קוקסאקי | ++ |
| 5. דיזנטריה | ++ |
| 6. דלקת אוזניים, סינוסיטיס, דלקת שקדים, דלקת הלחמית | ++ |
| 7. שחפת של העור | ++ |
| 8. מחלות פטרייתיות של העור | ++ |
| 9. לגיונלוזה | ++ |
| 10. אנטרוביאזיס | ++ |
| 11. ג'יארדאזיס | ++ |
| 12. קריפטוספורידיוזיס | ++ |
| 13. פוליו | + |
| 14. טרכומה | + |
| 15. דלקת זיבה | + |
| 16. סלמונלה חריפה גסטרואנטריטיס | + |
| קשר עם גורם המים: +++ - גבוה, ++ - משמעותי, + - אפשרי |
בשיטה זו של ניתוח מים מועברת כמות מסוימת של מים דרך ממברנה מיוחדת בגודל נקבוביות של כ-0.45 מיקרון. כתוצאה מכך, כל החיידקים הקיימים במים נשארים על פני הממברנה. לאחר מכן, הממברנה עם החיידקים מונחת לזמן מסוים במצע תזונתי מיוחד בטמפרטורה של 30-37 מעלות צלזיוס. בתקופה זו, הנקראת תקופת הדגירה, יש לחיידקים אפשרות להתרבות וליצור מושבות מוגדרות היטב שכבר קל לספור אותן. כתוצאה מכך, אתה יכול לראות את זה: או אפילו את התמונה הזו:  מאז שיטה זו של ניתוח מים כרוכה רק בקביעת המספר הכולל של מושבות - יוצרים חיידקים סוגים שונים, אז לפי תוצאותיו אי אפשר לשפוט באופן חד משמעי את נוכחותם של חיידקים פתוגניים במים. עם זאת, ספירת חיידקים גבוהה מצביעה על זיהום בקטריולוגי כללי של מים ועל סבירות גבוהה להימצאות אורגניזמים פתוגניים. |
בעת ניתוח מים, יש צורך לשלוט לא רק על התוכן של רעיל חומרים כימיים, אלא גם מספר המיקרואורגניזמים המאפיינים את הזיהום הבקטריולוגי של מי השתייה, TMF הוא המספר המיקרוביאלי הכולל. במים של אספקת מים מרכזית, מספר זה לא יעלה על 50 CFU/ml, ובבארות, בארות - לא יותר מ-100 CFU / מ"ל
מחקר סניטרי ומיקרוביולוגי של מים מתבצע בתכנון
צו לצורך מעקב שוטף, וכן לאפידמיולוגי מיוחד
עדות קים. המטרות העיקריות של מחקר כזה הן:
- מי שתייה של אספקת המים המרכזית (מי ברז);
- מי שתייה של אספקת מים לא מרכזית;
- מים ממקורות מים עיליים ותת-קרקעיים;
- שפכים;
- מים אזורי חוףימים;
- מי בריכת שחייה.
המדדים העיקריים להערכת המצב המיקרוביולוגי של מי השתייה בהתאם למסמכי הרגולציה הנוכחיים הם:
1. ספירת חיידקים כוללת (TMC) - מספר החיידקים המזופילים ב-1 מ"ל מים.
אם הטיטר- הנפח הקטן ביותר של מים (במ"ל) שבו חי לפחות אחד
תא מיקרוביאלי הקשור ל-BGKP.
מדד BGKP- כמות BGKP בליטר מים.
3. מספר הנבגים של קלוסטרידיה מפחיתי סולפיט ב-20 מ"ל מים.
4. מספר קוליפאג'ים ב-100 מ"ל מים.
קביעת TMC מאפשרת להעריך את רמת הזיהום המיקרוביולוגי של מי השתייה. אינדיקטור זה הכרחי לזיהוי דחוף של זיהום מיקרוביאלי מסיבי.
ספירת חיידקים כוללת- זהו מספר המיקרואורגניזמים האירוביים והאנאירוביים המזופיליים המסוגלים ליצור מושבות על אגר תזונתי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ובתוך 24 שעות, הנראים בעלייה פי שניים.
בעת קביעת מספר החיידקים הכולל, 1 מ"ל ממי הבדיקה מתווסף לצלחת פטרי סטרילית ויוצקים 10-12 מ"ל של אגר תזונתי מותך חם (44 מעלות צלזיוס). המדיום מעורבב בעדינות עם מים, באופן אחיד ו
מבלי להתפזר בועות אוויר לאורך תחתית הכוס, ואז לכסות במכסה ולהשאיר להתמצק. גידולים מודגרים בתרמוסטט ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. סופרת למעלה סה"כמושבות הגדלות בשני הכלים, וקובעות את הערך הממוצע. התוצאה הסופית מבוטאת כמספר יחידות יוצרות המושבות (CFU) ב-1 מ"ל ממי הבדיקה. 1 מ"ל של מי שתייה צריך להכיל לא יותר מ-50 CFU
הגדרה של BGKP
במקביל, נקבעים חיידקי קוליפורם נפוצים - OKB וחיידקי קוליפורמים תרמו-סובלניים - TKB.
GKB הם מוטות גרם שליליים, שאינם יוצרים נבגים, שמתסיסים לקטוז לחומצה וגז ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24-48 שעות. TKB הם בין OKB, יש להם את הסימנים שלהם, אבל אני מתסיס ב 44 ° C. לקביעת enterobacteria - השיטה של מסנני ממברנה או טיטרציה.
מספר חיידקים - הקריטריונים העיקריים להערכת המצב המיקרוביולוגי של מי השתייה,בהתבסס על המסמכים הרגולטוריים הנוכחיים, הוא TMC (מספר מיקרוביאלי כולל), המאפיין את מספר החיידקים האירוביים והאנאירוביים במיליליטר אחד של מים, הנוצרים ביום בטמפרטורה של 37 מעלות, בתווך מזין.
מדדי איכות של מי שתייה של מערכות אספקת מים.
אינדיקטור זה הוא כמעט הכרחי לזיהוי מהיר של זיהום מיקרוביאלי מסיבי.
ל קביעת מספר החיידקים הכוללמיליליטר אחד ממי הבדיקה מתווסף לצלחת פטרי סטרילית, ואז יוצקים 10-15 מ"ל של אגר תזונתי חם (כ-44 מעלות צלזיוס) בצורה מותכת. את המדיום מערבבים בזהירות עם מים, מפזרים בצורה אחידה וללא בועות אוויר על תחתית הכלי, ואז סוגרים במכסה ומשאירים בצלחת הפטרי עד להתמצקות. אותו הדבר נעשה בכוס השנייה. זריעה בתרמוסטט מודגרת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במהלך היום. לאחר מכן, בהגדלה כפולה במיקרוסקופ, נספר המספר הכולל של המושבות שגדלו בשתי כוסות, ונקבע הערך הממוצע. ב-1 מ"ל של מי שתייה לא צריך להיות יותר מ-50 CFU.
(שיטה עיקרית)
השיטה מבוססת על סינון נפח מסוים של מים (300 מ"ל) דרך מסנני ממברנה, גידול יבולים על מצע אבחון דיפרנציאלי עם לקטוז (אנדו) וזיהוי מושבות לאחר מכן לפי מאפיינים תרבותיים וביוכימיים.
מסנני ממברנה שהוכנו לניתוח (מבושלים או מעוקרים בדרך אחרת) מונחים בפינצטה סטרילית לתוך המשפך של מנגנון הסינון. נפח מים נמדד נשפך למשפך המכשיר ונוצר ואקום. לאחר הסינון מסירים את המסנן ומניחים אותו על פני המדיום התזונתי של אנדו מבלי להתהפך.
כוס אחת יכולה להתאים ל-3 מסננים. בחקר מי השתייה מסננים 3 נפחים של 100 מ"ל. כאשר מנתחים מים באיכות לא ידועה, רצוי לסנן נפחים אחרים של מים לקבלת מושבות מבודדות על המסנן (10.40, 100 ו-150 מ"ל).
צלחות הסינון מודגרות הפוך באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.
אם אין גידול על המסננים או שצמחו מושבות קרומיות לא טיפוסיות, עובשות ומטושטשות, הן נותנות תוצאה שלילית. OKB ו-TKB נעדרים ב-100 מ"ל מהמים הנחקרים.
עם צמיחתן של מושבות טיפוסיות מבודדות חיוביות ללקטוז (אדום כהה עם הדפסים בצדו האחורי של המסנן) על המסננים, מספרן נספר והן מתחילות לאשר את שייכותן ל-OKB ול-TKB.
מתבצעת בדיקה מיקרוסקופית של מריחות מ-3-4 מושבות מוכתמות בגרם (נלקחות בחשבון גראם שליליות);
נוכחות אוקסידאז נקבעת (אלה שלילי אוקסידאז נלקחים בחשבון, שכן מוטות גראם-שליליים חיוביים לאוקסידאז אינם שייכים לאנטרובקטריה, אך יכולים להיות, למשל, פסאודומונדים);
התסיסה של לקטוז לחומצה וגז נקבעת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, החשובה למושבות צבעוניות מעט וליחס שלהן ל-TKB, ובטמפרטורה של 44 ± 0.5 מעלות צלזיוס, על מנת להחליט אם הן שייכות ל-TKB. TKB.
הגדרת בדיקת אוקסידאז
על נייר מורטב ב-1% תמיסת אלכוהולα-naphthol ו-1% תמיסה מימית dimethylphenylenediamine, להחיל חלק מהמושבה הצבעונית עם לולאת פלטינה או מוט זכוכית. התגובה נחשבת חיובית אם בתוך דקה אחת, לכל היותר 4 דקות, מופיע צבע כחול או סגול. מושבות חיוביות לאוקסידאז אינן נלקחות בחשבון ואינן נתונות למחקר נוסף.
אפשר להעביר את המסנן עם מושבות לנייר המורטב במגיב. אתה יכול להשתמש במערכות נייר מוכנות (NIBs) מורטבות במים מזוקקים.
חלק מהמושבות של חיידקים גראם-שליליים אוקסידאז-שליליים נבדקים ביכולת לתסוס לקטוז. זה משתמש במדיום חצי נוזלי עם לקטוז ומחוון pH. הזריעה נעשית בהזרקה לתחתית ב-2 מבחנות. אחד מודגרים בטמפרטורה של 37 ± 1 מעלות צלזיוס למשך 24-48 שעות כדי לאשר את הקשר ל-TKB, השני בטמפרטורה של 44 ± 0.5 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות, רישום אפשרי לאחר 4-6 שעות כדי לאשר את נוכחות של TKB.
כאשר מושבות מושבות על המסנן, הן מסוננות, ואז מזוהות המושבות המבודדות המתקבלות. מושבות נספרות כ-OKB - אם הן אדומות באנדו, הן מכילות מוטות גרם-שליליים של אוקסידאז המפרקים לקטוז בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לחומצה וגז. מושבות נספרות כ-TKB אם הן מכילות מוטות שליליים של אוקסידאז גרם-שליליים שמתסיסים לקטוז בטמפרטורה של 44 מעלות צלזיוס לחומצה וגז (שכימה מס' 2).
תכנית מס' 2
תאריך פרסום: 2014-11-02; קראו: 1811 | הפרת זכויות יוצרים בדף
studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0.001 שניות) ...
ספירת חיידקים כוללת
| בשיטה זו של ניתוח מים מועברת כמות מסוימת של מים דרך ממברנה מיוחדת בגודל נקבוביות של כ-0.45 מיקרון. כתוצאה מכך, כל החיידקים הקיימים במים נשארים על פני הממברנה. לאחר מכן, הממברנה עם החיידקים מונחת לזמן מסוים במצע תזונתי מיוחד בטמפרטורה של 30-37 מעלות צלזיוס. בתקופה זו, הנקראת תקופת הדגירה, יש לחיידקים אפשרות להתרבות וליצור מושבות מוגדרות היטב שכבר קל לספור אותן. כתוצאה מכך, אתה יכול לראות את זה: או אפילו את התמונה הזו: מכיוון ששיטת ניתוח מים זו כוללת רק קביעת המספר הכולל של חיידקים יוצרי מושבות מסוגים שונים, תוצאותיה אינן יכולות לשפוט באופן חד משמעי את נוכחותם של חיידקים פתוגניים במים. עם זאת, ספירת חיידקים גבוהה מצביעה על זיהום בקטריולוגי כללי של מים ועל סבירות גבוהה להימצאות אורגניזמים פתוגניים. |
בעת ניתוח מים, יש צורך לשלוט לא רק על תכולת הכימיקלים הרעילים, אלא גם על מספר המיקרואורגניזמים המאפיינים את הזיהום הבקטריולוגי של מי השתייה. TMF הוא המספר הכולל של החיידקים. במים של אספקת מים מרכזית, מספר זה צריך לא יעלה על 50 CFU/ml, ובבארות, בארות - לא יותר 100 CFU/ml
מחקר סניטרי ומיקרוביולוגי של מים מתבצע בתכנון
צו לצורך מעקב שוטף, וכן לאפידמיולוגי מיוחד
עדות קים. המטרות העיקריות של מחקר כזה הן:
- מי שתייה של אספקת המים המרכזית (מי ברז);
- מי שתייה של אספקת מים לא מרכזית;
- מים ממקורות מים עיליים ותת-קרקעיים;
- שפכים;
- מים של אזורי החוף של הים;
- מי בריכת שחייה.
המדדים העיקריים להערכת המצב המיקרוביולוגי של מי השתייה בהתאם למסמכי הרגולציה הנוכחיים הם:
1. ספירת חיידקים כוללת (TMC) - מספר החיידקים המזופילים ב-1 מ"ל מים.
אם הטיטר- הנפח הקטן ביותר של מים (במ"ל) שבו חי לפחות אחד
תא מיקרוביאלי הקשור ל-BGKP.
מדד BGKP- כמות BGKP בליטר מים.
3. מספר הנבגים של קלוסטרידיה מפחיתי סולפיט ב-20 מ"ל מים.
4. מספר קוליפאג'ים ב-100 מ"ל מים.
קביעת TMC מאפשרת להעריך את רמת הזיהום המיקרוביולוגי של מי השתייה. אינדיקטור זה הכרחי לזיהוי דחוף של זיהום מיקרוביאלי מסיבי.
ספירת חיידקים כוללת- זהו מספר המיקרואורגניזמים האירוביים והאנאירוביים המזופיליים המסוגלים ליצור מושבות על אגר תזונתי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ובתוך 24 שעות, הנראים בעלייה פי שניים.
בעת קביעת מספר החיידקים הכולל, 1 מ"ל ממי הבדיקה מתווסף לצלחת פטרי סטרילית ויוצקים 10-12 מ"ל של אגר תזונתי מותך חם (44 מעלות צלזיוס). המדיום מעורבב בעדינות עם מים, באופן אחיד ו
מבלי להתפזר בועות אוויר לאורך תחתית הכוס, ואז לכסות במכסה ולהשאיר להתמצק. גידולים מודגרים בתרמוסטט ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. ספור את המספר הכולל של המושבות שגדלו בשני הכלים וקבע את הערך הממוצע. התוצאה הסופית מבוטאת כמספר יחידות יוצרות המושבות (CFU) ב-1 מ"ל ממי הבדיקה. 1 מ"ל של מי שתייה צריך להכיל לא יותר מ-50 CFU
הגדרה של BGKP
במקביל, נקבעים חיידקי קוליפורם נפוצים - OKB וחיידקי קוליפורמים תרמו-סובלניים - TKB.
GKB הם מוטות גרם שליליים, שאינם יוצרים נבגים, שמתסיסים לקטוז לחומצה וגז ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24-48 שעות. TKB הם בין OKB, יש להם את הסימנים שלהם, אבל אני מתסיס ב 44 ° C. לקביעת enterobacteria - השיטה של מסנני ממברנה או טיטרציה.
מספר חיידקים - הקריטריונים העיקריים להערכת המצב המיקרוביולוגי של מי השתייה,בהתבסס על המסמכים הרגולטוריים הנוכחיים, הוא TMC (מספר מיקרוביאלי כולל), המאפיין את מספר החיידקים האירוביים והאנאירוביים במיליליטר אחד של מים, הנוצרים ביום בטמפרטורה של 37 מעלות, בתווך מזין. אינדיקטור זה הוא כמעט הכרחי לזיהוי מהיר של זיהום מיקרוביאלי מסיבי.
ל קביעת מספר החיידקים הכוללמיליליטר אחד ממי הבדיקה מתווסף לצלחת פטרי סטרילית, ואז יוצקים 10-15 מ"ל של אגר תזונתי חם (כ-44 מעלות צלזיוס) בצורה מותכת. את המדיום מערבבים בזהירות עם מים, מפזרים בצורה אחידה וללא בועות אוויר על תחתית הכלי, ואז סוגרים במכסה ומשאירים בצלחת הפטרי עד להתמצקות.
עקרונות קיצוב מי שתייה
אותו הדבר נעשה בכוס השנייה. זריעה בתרמוסטט מודגרת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במהלך היום. לאחר מכן, בהגדלה כפולה במיקרוסקופ, נספר המספר הכולל של המושבות שגדלו בשתי כוסות, ונקבע הערך הממוצע. ב-1 מ"ל של מי שתייה לא צריך להיות יותר מ-50 CFU.
מי שתייה
חוסר ההתאמה של מים, כמו גם כימיקלים, הופך אותם לבלתי ניתנים לשתייה. אם מקור המים שלכם אינו מוגן מחשיפה ישירה של הסביבה או שמערכות השירות מיושנות או לא נוקו במשך זמן רב, אזי בדיקה מיקרוביולוגית היא חובה. הבריאות והבטיחות שלך תלויים בזה! זה חשוב במיוחד למי שמשתמש בבאר. - אדמה, היא מתקשרת ישירות עם האדמה, כלומר מאיימת "לשתות" אותך עם חנקות, מתכות כבדות, אמוניה וכמובן חומרים אורגניים מזיקים שנכנסים לקרקע כתוצאה מפעילות של חוות חקלאיות או אדמות.
טבלה 1 מציגה את האינדיקטורים המיקרוביולוגיים של התקן הנוכחי SanPiN 2.1.4.1074-01 למי שתייה:
טבלה 1. תקנים מיקרוביולוגיים למי שתייה
ניתוח מיקרוביולוגי סטנדרטי
הניתוח המיקרוביולוגי הסטנדרטי של מי השתייה באוניברסיטת מוסקבה כולל קביעת שלושה אינדיקטורים: המספר הכולל של החיידקים, מספר החיידקים הכוללים קוליפורמים וחיידקי קוליפורמים תרמו-סובלניים.
ניתוח מיקרוביולוגי מתקדם
ניתוח מיקרוביולוגי מורחב של מים כולל ניתוח של חמישה מדדים: ספירת חיידקים כוללת, ספירת חיידקי קוליפורמים כוללת, ספירת חיידקי קוליפורמים תרמו-סובלניים, טיטר קוליפאג ותכולת נבגים של חיידקים מפחיתי סולפיט.
ניתוח מיקרוביולוגי של מקווי מים עיליים (בריכות, נהרות, בריכות)
לעתים קרובות יש מקווי מים באתרים שלנו או בקרבת מקום, שבהם אנחנו וילדינו אוהבים לבלות בהנאה. כמובן שהמים במאגרים אלו אינם ראויים לשתייה, אך בטיחותם לבני אדם, כמו גם השתייה, מוסדרת. טבלה 2 מציגה את האינדיקטורים המיקרוביולוגיים של התקן הנוכחי לדרישות היגייניות להגנה על מים עיליים (SanPiN 2.1.5.980-00)
טבלה 2. תקנים מיקרוביולוגיים לשימוש במים לפנאי, וכן בגבולות אזורים מיושבים
ניתוח מיקרוביולוגי סטנדרטי (מי קרקע)
ניתוח מיקרוביולוגי של מים שאינם מיועדים לשתייה כולל קביעת מספר שני האינדיקטורים: סך כל החיידקים התרמו-סבילים לקוליפורמים.
ניתוח מיקרוביולוגי מתקדם (מי קרקע):
בנוסף לשני האינדיקטורים העיקריים, אנו מציעים לערוך ניתוח נוסף עבור התוכן של: קוליפגים, שמרים אופורטוניסטיים ומיקרומיציטים (לוויינים תכופים של מחלות אופורטוניסטיות) ואינדקס הטיהור העצמי של המאגר.
קביעת חיידקים מהסוג סלמונלה ומהסוג Enterococcus
עם עודף משמעותי של תקני SanPiN 2.1.5.980-00, כמו גם זיהום צואה אפשרי של המאגר, אנו מציעים לנתח את נוכחותם של פתוגנים של זיהומי מעיים (סוג סלמונלה ואנטרוקוקוס).
מילון מונחים
שפע מיקרוביאלי כולל (TMC)
השיטה קובעת במי השתייה את המספר הכולל של מיקרואורגניזמים אירוביים ופקולטטיביים פקולטטיביים (FMC) המסוגלים ליצור מושבות על אגר תזונתי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות, הנראות בעלייה של פי 2. אינדיקטור זה מזהה חיידקים פוטנציאליים שיכולים להזיק לבריאות האדם.
חיידקי קוליפורם נפוצים (TCB)
חיידקי קוליפורם נפוצים (CBC) הם גרם שלילי, אוקסידאז שלילי, מוטות שאינם יוצרים נבגים שיכולים לצמוח על מדיית לקטוז דיפרנציאלית, להתסיס לקטוז לחומצה, אלדהיד וגז בטמפרטורה של (37 + 1) מעלות צלזיוס עבור ( 24-48) שעות. נציגים רבים של קבוצה זו הם מיקרואורגניזמים של המיקרופלורה הרגילה של הקיבה, כך שהעודף של קבוצה זו של מיקרואורגניזמים עשוי להצביע על זיהום מים אנתרופוגני (כולל צואה).
חיידקים קוליפורמיים תרמיים (TCB)
חיידקי קוליפורמים תרמיים (TCB) הם בין החיידקים הקוליפורמיים הנפוצים, בעלי כל המאפיינים שלהם ובנוסף, מסוגלים לתסוס לקטוז לחומצה, אלדהיד וגז בטמפרטורה של (44 ± 0.5) מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. בנוסף ל-OKB, הם מהווים קבוצת אינדיקטור, אולם הם יציבים יותר בסביבה: זו הסיבה שזיהוי של קבוצת מיקרואורגניזמים זו במים יכול להצביע על זיהום חד משמעי שלה במוצרי פסולת אנושיים.
קוליפאג'ים
קוליפאג'ים, שנקבעו בשיטה הסטנדרטית (MUK 4.2.1018-01), הם נגיפי E. coli (Escherichia coli) ונחשבים על ידי אפידמיולוגים כשיטה נוספת, ולעתים רגישה יותר, בקביעת זיהום מים על ידי מיקרואורגניזמים מסוג E. coli. חלקיקי הווירוס, והקוליפאג'ים בפרט, עמידים יותר לסביבה מאשר החיידקים המארחים שלהם. בהקשר זה, נוכחות של קוליפאג'ים יכולה לשמש סמן אמין לזיהום צואה ישן יותר של מקור המים. הוכח מתאם ישיר בין תכולת הקוליפאג'ים במים לבין נגיף האנטרוב המסוכן לבני אדם, ולכן נוכחות הקוליפאג'ים במים עשויה להעיד על זיהום ויראלי של המקור. נוֹכְחִי מסמך נורמטיבי(SanPiN 2.1.4.1074-01) מרמז על היעדר קוליפאג'ים ב-100 מ"ל מים.
נבגים של קלוסטרידיה מפחיתי סולפיט
קלוסטרידיות מפחיתות סולפיט הן מיקרואורגניזמים אנאירוביים בצורת מוטות היוצרים נבגים, המהווים אינדיקטור מיקרוביולוגי נוסף לזיהום צואה של מאגר. שלא כמו חיידקי קוליפורמים לא יציבים יחסית וחיידקי קוליפורמים תרמו-סובלניים, נבגי קלוסטרידיאלים יכולים לשרוד במקווי מים. במשך זמן רב. קלוסטרידיה נמצאות במעיים של בני אדם וחיות בית, עם זאת, כאשר הם נבלעים עם מים פנימה במספרים גדוליםעלול לגרום ל הרעלת מזון. קלוסטרידיות מפחיתות סולפיט כוללות קלוסטרידיום מסוכן לאדם (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), הגורמים למחלות קשות. על פי התקן הנוכחי (SanPiN 2.1.4.1074-01), יש להיעדר נבגי Clostridia ב-20 מ"ל מים.
שמרים אופורטוניסטיים ומיקרומיצטים
שמרים פתוגניים ומיקרומיצטים (עובשים) כוללים קבוצה הטרוגנית גדולה של אורגניזמים פטרייתיים שיכולים לגדול באופן ספרותי ב-37 מעלות צלזיוס. הוא כולל נציגים כמו קנדידה אלביקנס ו-Cryptococcus neoformans, שהם גורם נפוץ במחלות אופורטוניסטיות אנושיות, הגורמות לקנדידה ( מחלות פטרייתיותעור), קיכלי וכו'. אורגניזמים מיקרומיציטים אחרים (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) עשויים להיות גורמים רגישים פעילים תגובות אלרגיותולפעמים האלרגנים עצמם. בפדרציה הרוסית, מים אינם סטנדרטיים עבור עובשים ואורגניזמים שמרים במים.
קביעת מדד הניקוי העצמי (מתוך MUK 4.2.1884-04)
המספר הכולל של מיקרואורגניזמים אינו מתוקנן במים של מאגרים באזורי בילוי, שכן רמת קבוצת המיקרואורגניזמים הזו תלויה במידה רבה ב תכונות טבעיותכל חפץ, עונה וכו'.
עם זאת, בעת בחירת מקור חדש לאספקת מים או מקום בילוי במים של מאגרים, יש צורך בנוסף לקבוע את כלל אוכלוסיית החיידקים, הגדלה:
- בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות;
- ב-22 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות.
ההנחה היא ש:
- TMP ב-37 מעלות צלזיוס מיוצג בעיקר על ידי מיקרופלורה אלוכטונית (המוכנסת למאגר כתוצאה מזיהום אנתרופוגני, כולל זיהום צואה);
- TMP ב-20-22 מעלות צלזיוס מיוצג, בנוסף למיקרופלורה האלוכטונית, אבוריג'יני (טבעית, אופיינית למאגר זה).
היחס בין המספרים של קבוצות אלה של מיקרואורגניזמים מאפשר לשפוט את עוצמת תהליך הטיהור העצמי. בסוף תהליך הניקוי העצמי, מקדם OMC הוא 22°C / OMC 37°C. במקומות של זיהום משפכים ביתיים, הערכים המספריים של שתי הקבוצות קרובים.
המחוון מאפשר לך לקבל מידע נוסףעל המצב הסניטרי של מקווי מים, מקורות זיהום, תהליכי טיהור עצמי.