Аллергические диагностические пробы. У1.4. Кожные тесты Кожные иммунологические пробы принцип метода

Кожные пробы - это простой и достоверный метод выявления специфических IgE . Выделяют накожные - пунктационную и скарификационную - и внутрикожные пробы. Положительные результаты кожных проб (эритема и волдырь в месте введения аллергена) имеют диагностическое значение только в сочетании с данными анамнеза, физикального и лабораторных исследований.

Показания и выбор аллергенов. Основное показание для проведения кожных проб - выявление аллергенов, контакт с которыми вызывает заболевание. При выборе аллергенов для проведения проб следует учитывать вероятность контакта с ними в данной местности (следует отметить, что пыльца, вызывающая аллергию , специфична для определенных местностей, а микроклещи , плесневые грибы и эпидермис животных повсюду одинаковы. В США диагностические и лечебные препараты аллергенов выпускаются в виде концентрированных или разбавленных экстрактов.

Существуют диагностические препараты аллергенов для накожных и внутрикожных проб. Срок годности концентрированных экстрактов аллергенов составляет 2-3 года. Он зависит от концентрации препаратов и температуры их хранения. При температуре хранения 2-8*С экстракты, разведенные в соотношении 1:100, сохраняют свои свойства до 1 года, а менее концентрированные (1:1000) теряют активность уже через несколько недель или месяцев. В связи с этим препараты аллергенов, особенно разведенные, необходимо регулярно обновлять. Препараты, которые дозируются в АЕ, а также яды жалящих насекомых и другие аллергены, которые дозируются в микрограммах, лучше всего сохраняются в лиофилизированном виде.

Меры предосторожности:

Нельзя проводить кожные пробы во время бронхоспазма .

Перед внутрикожной пробой следует провести накожную, поскольку с помощью накожной пробы можно выявить сенсибилизацию при минимальном риске системной реакции.

Поскольку при проведении кожных проб возможен анафилактический шок , под рукой всегда должны находиться средства неотложной помощи.

Кожные пробы может проводить опытная медицинская сестра или лаборант, но обязательно в присутствии врача.

Накожные пробы лучше всего проводить на спине, поскольку здесь одновременно можно поставить пробы с несколькими аллергенами.

Техника проведения.

Пунктационные пробы:

Кожу очищают 70% изопропиловым или этиловым спиртом. Чтобы волдыри не сливались, расстояние между соседними проколами должно быть не менее 2 см. Намечают места проколов, каждое пятое нумеруют (это облегчает учет результатов). На каждую намеченную точку наносят по капле экстракта аллергена в разведении 1:10, 1:20 или неразведенный стандартизированный препарат и прокалывают кожу. Приспособления для прокалывания кожи должны быть удобными, недорогими, одноразовыми, а также обеспечивать стандартную глубину прокола. Обычно используются стерильные иглы 26 G, стерильные швейные иглы, стерильные иглы Морроу Браун и пластиковые иглы Дермапик. Иглу проводят через каплю экстракта аллергена под углом 45* и прокалывают кожу так, чтобы не выступила кровь. Вынимая иглу, слегка приподнимают кожу. Иглу нельзя использовать повторно, ее сразу выбрасывают в специальный контейнер. У игл Морроу Браун и подобных им приспособлений длина острия составляет 1 мм, что обеспечивает стандартную глубину прокола. Иглы Дермапик содержат аллерген на своем острие. Через 15- 20 мин после прокола проверяют, не появились ли эритема и волдырь. Измерив наименьший и наибольший диаметры волдыря, вычисляют среднее значение в миллиметрах. Если волдырь более 10 мм в диаметре появился менее чем через 15 мин после прокола, тщательно удаляют аллерген с кожи.

Реакцию на неспецифическое раздражение оценивают по отрицательной контрольной пробе с растворителем. Обычно это физиологический раствор с фосфатным буфером (рН 7,4) с добавлением 0,4% фенола (для подавления роста бактерий).

Кожные пробы у больных с уртинарным дермографизмом считаются положительными, если реакция на аллерген более выражена, чем реакция на растворитель.

Положительную контрольную пробу ставят с 0,1% раствором гистамина. Участок для проведения контрольной пробы должен быть удален от места проведения остальных проб. Положительная контрольная проба (оценивается как "+++") используется для оценки результатов проб с аллергенами, а также позволяет выявить сниженную реактивность кожи, которая наблюдается у детей, стариков и больных, принимающих Н1-блокаторы .

Мультитестовый аппликатор - одноразовое приспособление для пунктационных проб, которое позволяет одновременно вводить разные аллергены. Результаты, полученные с помощью этого приспособления, совпадают с результатами внутрикожных проб, радиоаллергосорбентного теста и данными анамнеза. Основное достоинство аппликатора заключается в том, что он позволяет максимально стандартизировать условия проведения кожных проб (глубину прокола кожи, расстояние между проколами, дозу аллергена), основной недостаток - высокая стоимость.

Скарификационные пробы менее чувствительны, чем пунктационные, и занимают больше времени.

Внутрикожные пробы проводятся при сомнительных результатах пунктационных проб. Для развития положительной реакции при внутрикожных пробах требуется более низкая доза аллергена. Аллерген, вызвавший положительную пунктационную пробу, при внутрикожном введении может привести к выраженной местной и даже к системной реакции. Если положительны менее пяти пунктационных проб, внутрикожные пробы можно проводить сразу. Если положительных пунктационных проб больше, внутрикожные пробы проводят на следующий день. Во избежание системной реакции внутрикожные пробы с перекрестнореагирующими аллергенами, особенно с растительными экстрактами, проводятся в разные дни. Подбор аллергенов с учетом климатогеографических условий и данных анамнеза позволяет свести число проб к минимуму. Внутрикожные пробы с пищевыми аллергенами не проводятся.

Внутрикожные пробы:

Для внутрикожных проб используют экстракты аллергенов в разведении 1:100. В качестве положительного контроля используется 0,01% раствор гистамина, реакция на который оценивается как "+++", в качестве отрицательного контроля - растворитель. Расстояние между участками введения аллергенов и контрольными пробами должно быть больше, чем при проведении пунктационных проб.

Для внутрикожных проб используют верхнюю треть внутренней поверхности предплечья или наружную поверхность плеча. У детей 2-5 лет аллергены удобнее вводить в кожу спины.

Кожу очищают спиртом и намечают места инъекций, расстояние между которыми должно быть не менее 2,5 см.

В одноразовый стерильный туберкулиновый шприц набирают 0,1 мл экстракта аллергена. Поскольку появление волдыря при внутрикожном введении воздуха можно принять за положительную реакцию, необходимо полностью удалить пузырьки воздуха из шприца.

Кожу растягивают и вводят иглу под углом 45* срезом вниз. Срез иглы должен полностью погрузиться в кожу.

После введения примерно 0,02 мл раствора должна образоваться папула диаметром 1-3 мм. Если раствор попадает под кожу или вытекает наружу, папула отсутствует. В этом случае аллерген вводят повторно в другое место.

Реакцию оценивают через 15-30 мин. Существуют два способа оценки результатов. По одному из них измеряют максимальный и минимальный диаметры эритемы и волдыря, а затем рассчитывают среднее значение, как при оценке результатов накожных проб, по другому - измеряют лишь максимальный диаметр. Чтобы границы волдыря были видны четче, кожу вокруг него сдавливают двумя пальцами. При оценке результатов обращают внимание на форму волдыря. Если границы волдыря неровные, это отмечают в протоколе исследования.

Некоторые авторы предпочитают сначала вводить более разбавленные растворы аллергенов, например 1:100000, а затем - растворы, концентрация которых последовательно увеличивается в 10 раз. Для каждого аллергена принята максимально допустимая доза, в отсутствие реакции при ее достижении проба считается отрицательной.

Применяют кожные тесты для выявления аллергических заболеваний, опосредованных реакциями гиперчувствительности I и IV типов. Техника выполнения кожных тестов описана в методическом письме А.Д.Адо и сотр. («Применение аллергенов неинфекионного происхождения для специфической диагностики и десенсибилизации больных аллергическими заболеваниями», М., МЗ СССР, 1969). Для кожных тестов используются стандартные аллергены, содержащие 10000 единиц белкового азота (PNU) в 1 мл. Как правило, кожные пробы ставят на внутренней поверхности предплечья. Одновременно ставят пробы с контрольной жидкостью и гистамином. При заболеваниях кожи тесты выполняют на участках, не затронутых повреждением. В настоящее время используются следующие кожные пробы: капельная, аппликационная, прик-тест, скарификационная, внутрикожная.

Капельная проба

На предварительно обезжиренную 70% спиртом кожу наносят каплю стандартного аллергена. Реакцию оценивают через 20 минут. Оценка пробы приведена в таблице 15-1.

Оценка капельной пробы

Аппликационная проба

На предварительно обработанную 70% спиртом кожу накладывают кусок марли (1 см3), смоченный раствором аллергена, и фиксируют лейкопластырем. Реакцию учитывают через 30, 60 мин, 6ч, 12ч, 24ч, 48ч, 72ч. Оценка аппликационной пробы приведена в таблице 15-2.

Оценка аппликационной пробы

Прик-тест

Прик-тест выполняется специальным prick-ланцетом. Используемое устройство позволяет стандартизовать глубину укола (1,0-1,5 мм). Укол выполняется через каплю аллергена и контрольную жидкость. Результат прик-теста учитывают через 15-20 минут. Оценка прик-теста приведена в таблице 15-3.

Оценка прик-тестов.

Скарификационная проба

На предплечье, обработанное 70% спиртом, наносят по капле 0,01% гистамина, контрольной жидкости и аллергенов (одновременно 6-10 аллергенов) на расстоянии 4-5 см друг от друга. Скарификатором через каждые капли наносят две параллельные царапины длиной 4-5 мм и расстоянием между ними 2 мм. Царапины делают поверхностными, не повреждая сосудов кожи. Через 10 минут после скарификации кожи капли промокают ватными тампонами. Пробы учитывают через 10-20 минут. Оценка скарификационных проб приведена в таблице 15-4.

Оценка скарификационных проб.

Следует помнить, что скарификационные пробы часто дают ложноположительные реакции.

Внутрикожные пробы

Выполняют, как правило, с микробными аллергенами. С неинфекционными аллергенами проводят только в случаях, когда аппликационные и скарификационные тесты дают отрицательный результат, а анамнез ясно свидетельствует об аллергии.

Техника выполнения пробы заключается в следующем: после обработки кожи предплечья или спины 70о спиртом инсулиновым шприцом внутрикожно вводят 0,02-0,1 мл аллергена. Вводимый внутрикожно аллерген должен быть в 10 раз меньшей концентрации, чем при скарификационном тестировании. В качестве контроля вводят внутрикожно контрольную жидкость и скарификационно раствор гистамина. Результаты пробы учитывают через 20 мин, 6ч, 12ч, 24ч, 48ч в соответствии со шкалой оценки, так как реакции на инфекционные аллергены могут протекать как по немедленному, так и замедленному типу.

Следует помнить, что внутрикожные пробы менее специфичны, чем накожные тесты и довольно часто дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Пр внутрикожном тестировании одновременное количество исследуемых аллергенов не должно превышать 4-5.

Оценка внутрикожных тестов

Анализы на аллергию включают в себя кожный тест или анализ крови, они оба направлены на обнаружение аллергена, который может вызвать аллергическую реакцию у человека. Предпочтение отдается обычно кожным тестам, потому что они быстры, надежны и стоят меньше, чем анализы крови, однако оба вида теста можно использовать одновременно.

Кожные пробы

Небольшое количество исследуемого аллергена наносится на или под кожу, для того чтобы увидеть, есть ли аллергическая реакция . Существует три типа кожных проб:

• Скарификационная проба . Данные тест проводится так: помещается на кожу капля раствора, содержащего возможный аллерген, далее наносятся небольшие царапины или уколы иглы, которые позволяют аллергену войти под кожу. Если кожа начинает краснеть или начинается вздуваться, вызывая зуд (волдырь), это обычно означает, что человек имеет аллергию на данный аллерген. Это называют положительной реакцией.
• Внутрикожная проба . Во время этого теста небольшое количество аллергена вводится под кожу. Внутрикожный аллергический тест проводится, когда скарификационный тест не дал результатов, но аллерген все еще в поле подозрения. Внутрикожный тест более чувствителен, чем скарификационный тест, и чаще дает положительный результат у людей, у которых не наблюдались признаки исследуемого аллергена (ложно-положительные результаты теста).
• Аппликационная проба . На кожу в повязке (небольшой кусочек марли) помещается некоторое количество аллергена, затем все это закрывается повязкой, на 24-72 часа. Этот тест используется, чтобы диагностировать кожную аллергию, которую называют контактным дерматитом.

Анализ крови

Анализы крови на аллергию выявляют вещества в крови, которые называются антителами. Анализ крови не настолько чувствителен, как кожные пробы, зачастую его используют у людей, которые по тем или иным причинам не могут пройти кожные тесты .

Наиболее распространенный тип используемого анализа крови является иммуно-ферментный анализ крови. Этот анализ измеряет уровень антител в крови (которые называются иммуноглобулин E или IgE) на которые организм может выдать аллергическую реакцию. Уровень IgE зачастую повышен у людей с аллергиями или астмой.

Другие методы тестирования лаборатории, такие как аллергосорбентный тест или иммунологический тест используется для получения более подробной информации.

Результаты тестов на аллергию и дальнейшее ее лечение , это - ваш личный выбор.

Зачем это делается

Аллергическая проба делается для того, чтобы узнать, какие вещества (аллергены) вызывают аллергическую реакцию.

Скарификационный тест кожи проводится для:

• Идентификация ингалируемых (аэроаллергены) аллергенов, таких как деревья, кусты, пыльца, формы, пыль , перья и перхоть животных.
• Идентификация пищевых аллергенов (таких как яйца , молоко , арахис, орехи , рыба , соя , пшеница или морские моллюски).
• Идентификация аллергии у человека на лекарства или яды насекомых.

Анализ крови

Анализ крови используется вместо скарификационной пробы, если обследуемый:

• Имеет крапивницу или другое кожное заболевание, например как экзема , которая затрудняет интерпретирование результатов скарификационного теста.
• Не может прекратить принимать лекарства, такие как антигистаминные препараты или трициклические антидепрессанты , которые блокируют или уменьшают реакцию на аллерген, даже если человек имеет аллергию.
• Имеет серьезную аллергическую реакцию (анафилактический шок).
• Имеет положительные кожные пробы ко многим продуктам. Иммуно-ферментный анализ крови способен выявить продукты , на которые у человека самая серьёзная аллергическая реакция.

Как подготовиться к анализам

Многие лекарства могут повлиять на результаты кожных тестов. Вы должны обязательно сообщить вашему врачу обо всех лекарствах которые вы принимаете. Вы должны прекратить принимать некоторые лекарства, такие как, некоторые трициклические антидепрессанты и антигистамины , типа цетиризин (Зиртек), фексофенадин (Аллегра), и лоратадин (Кларитин), до того как вам будет сделан кожный тест на аллергены.

Обсудите со своим врачом любые вопросы, которые у вас имеется относительно необходимости в проведении теста, его рисках, как он будет сделан, или что покажут результаты. Чтобы оценить всю важность этого теста для себя, заполните медицинскую форму информации о тесте.

Как сдаются анализы на аллергию

Кожные пробы

Медицинский работник, делающий скарификационный или внутрикожный тест :

• Обеззаразит место для теста медицинским спиртом;
• Закапает на обеззараженное место возможные аллергены. На 2,5 см кожи 1 капля; на 5см кожи 2 капли . Это позволяет проверить несколько аллергенов одновременно;
• Сделает иглой царапины на коже сквозь каждую каплю. Игла, проходя сквозь каплю, позволяет части аллергена проникнуть в кожу. При внутрикожном тесте иглу вводят немного глубже в кожу;
• Проверит кожу через 12 - 15 минут на предмет покраснения или вздутия кожи (волдырей). Если будет обнаружен волдырь, это означает, что у вас аллергия на данный аллерген (это называется положительной реакцией).

Метод , альтернативный скарификационному тестированию, использует устройство с 5 - 10 контактами (головками), которые опускают в бутылки с аллергенами. Данное устройство прижимают к коже предплечий или спины таким образом, что бы все контакты (головки) касались кожи одновременно.

Если результат скарификационного теста отрицателен, вы можете чуть позже попробовать пройти внутрикожный тест. Скарификационный тест обычно делается первым, потому что у внутрикожного теста есть больший шанс возникновения серьезной аллергической реакции.

Скарификационный тест и внутрикожный тест обычно занимают менее часа каждый.

Аппликационный тест также использует небольшие дозы проверяемого аллергена. Для этого теста:

• Аллергены помещены в марли, которые похожи на лейкопластырные повязки;
• Эти повязки помещают на кожу (обычно на спину). Приблизительно это процедура занимает 40 минут, в зависимости от того, какое количество таких повязок используется;
• Повязки будут находиться на вашем теле в течение 24 - 72 часов. Во время, когда на вашем теле будут находиться повязки, вам нельзя будет принимать душ , ванну или заниматься физическими нагрузками, которые могут спровоцировать потовыделение. Это может ослабить контакт повязок с телом, что даст некорректные результаты;
• По истечении необходимого времени, врач удалит с вашего тела повязки с аллергенами и проверит аллергическую реакцию.

Анализ крови

Медицинский работник, который берет вашу кровь на анализ:

• Перетянет жгутом ваше предплечье, чтобы остановить приток крови. Это сделает вены набухшими и более доступными для ввода иглы;
• Смажет место укола медицинским спиртом;
• Воткнет иглу в вену. Может понадобиться не одна игла, а несколько;
• Поднесет пробирку к игле, чтобы заполнить ее кровью;
• Удалит иглу из вены, когда крови в пробирке будет собрано достаточно;
• Закроет место прокола небольшим пластырем.

Образец крови будет помещен в специальный конверт и отправлен в лабораторию, для проведения анализа на присутствие в крови антител к какому-либо из проверяемых аллергенов. Если определенные антитела будут найдены, это означает, что у вас имеется аллергия.

Что вы почувствуете во время анализов

Кожные пробы

При проведении скарификационного и внутрикожного теста, вы можете ощущать небольшой дискомфорт, когда игла проходит сквозь вашу кожу или царапает вашу кожу через капли аллергена.

Если у вас появилась аллергическая реакция от какой-либо из кожных проб, вы можете испытывать зуд, болезненные ощущения и отёк в местах, где аллерген был нанесен на кожу. После проведенного тестирования, для облегчения перечисленных выше последствий, можно воспользоваться прохладными повязками или стероидными мазями, которые вы можете приобрести в аптеке без рецепта врача.

Анализ крови

Вы не будете чувствовать ничего, кроме небольшого укола от иглы, поскольку игла проходит через кожу. Некоторые люди чувствуют острую боль во время нахождения иглы в вене. Но многие люди не чувствуют этой боли или ощущают лишь незначительный дискомфорт после того, как игла входит в вену.

Риски при тестировании на аллергию

Кожные пробы

Основной риск при скарификационном тесте или внутрикожной пробе - серьезная аллергическая реакция, называемая анафилактическим шоком. Признаки серьезной аллергической реакции включают зуд, отёк лица или всего тела, проблемы с дыханием и пониженное давление , все это может вызвать шок . Анафилактическая реакция является опасной для жизни и причислена к чрезвычайным медицинским ситуациям. При анафилактической реакции пациенту срочно требуется скорая помощь . Но серьезные последствия такие, как анафилактическая реакция, довольно таки редко случаются после скарификационного тестирования.

Если на тестируемых участках кожи вы испытываете сильный зуд, отёк или болезненные ощущения срочно вызовите вашего врача.

Анализ крови

Также имеется небольшой риск при взятии крови из вены.

• У вас может появиться небольшой синяк в месте укола. Вы можете снизить риск возникновения синяка, если будете держать прижатой к месту укола вату, некоторое время после взятия крови.
• В редких случаях, после взятия образца крови, вена может воспалиться. Причиной этому может явиться флебит и обычно в данной ситуации вам сможет помочь применение теплого компресса несколько раз в день .
• Проблемой также может быть длительное кровотечение у людей с нарушением свертываемости крови. Аспирин , варфарин и другие, разбавляющие кровь лекарства, могут стать причиной кровотечения . Если у вас есть нарушение со свертываемостью крови или проблемы с тромбобразованием, или вы употребляете кроверазбавляющие препараты , скажите об этом вашему врачу до того как вам сделают анализ крови.

Результаты анализов

Кожная проба или анализ крови могут указать вам, какое вещество или аллерген являются причиной вашей аллергии.

Кожные пробы

Кожные пробы дают ответы за счет того, что человек подвергается воздействию подозреваемых аллергенов. Результаты кожных проб можно увидеть незамедлительно, после того как пробы будут сделаны на коже пациента.

Анализы крови

Анализы крови на аллергию выявляют вещества в крови, которые называются антителами. Анализы крови на аллергию обычно готовы в течение 7 дней.

Что влияет на тест

Причины, по которым вы не можете пройти кожные тесты на аллергию:

• Интенсивные упражнения , которые вызывают чрезмерное потение.
• Влажная кожа или потоотделение.
• Принятие лекарств, таких как антигистамины или трициклические антидепрессанты.

О чем следует подумать

• Если у вас подозревается аллергия, то вам необходимо будет сделать тест на аллергию. Помните, аллергию можно вылечить медикаментозными средствами, а иногда и просто изменив свой образ жизни .
• Кожные пробы на аллергию:
• Самый легкий и наиболее дешевый метод для того, чтобы идентифицировать аллергию у большинства людей;
• Более надежен, чем анализ крови для идентификации ингалируемых (аэроаллергены) антител, таких как пыльца, пыль, перхоть животных;
• Не работает, если нужно проверить аллергию на пищевые продукты. Для этого может подойти способ исключения подозреваемых продуктов из рациона питания;
• Могут быть неприятными для детей и их родителей;
• Могут занимать около 3-4 часов.
• Анализ крови на аллергию:
• Менее чувствительны, чем кожные пробы. Таким образом, человек может иметь положительную реакцию на кожную пробу и иметь отрицательную реакцию на анализ крови;
• Употребление антигистаминов или трициклических антидепрессантов не влияет на результаты теста. Нет необходимости отменять препараты людям, которые готовятся пройти тестирование;
• Является хорошей альтернативой кожным пробам, если у вас очень чувствительная кожа или вы имеете проблемы с кожей , например, такие, как экзема ;
• Не вызывает аллергическую реакцию. Анализы крови используются, если ранее вы испытали анафилактический шок;
• Гораздо дороже, чем кожные пробы.
• Если ранее вы подвергались частому контакту с латексом, то вам необходимо проверить свой организм на аллергию к латексу, до того как вам будут делать операцию. Для данной ситуации подойдет анализ крови. Если у вас будет выявлена латексная аллергия, то во время операции хирурги не должны будут использовать латексные перчатки.
• Другие анализы крови, такие как фтороаллергосорбентный тест, множественный аллергосорбентный тест, и радиоаллергосорбентный тест также используются для выявления аллергенов.

Аллергические диагностические пробы - методы диагностики аллергии. Проводятся после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов. Пробы выполняют вне фазы обострения заболевания и не раньше чем через 2-3 недели после перенесенной острой аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.

В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть прямыми и непрямыми. При прямых кожных пробах аллерген вводят внутрикожно или повреждая эпидермис путем укола, царапины. При капельных и аппликационных прямых кожных пробах аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 мин (немедленная реакция), через 6-12 ч (реакция переходного типа), через 24-48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунологического механизма аллергической реакции. Среди прямых кожных проб различных видов наиболее чувствительной является внутрикожная, затем следуют скарификационная, укол, аппликационная, капельная.

К непрямым кожным пробам относится реакция Прауснитца - Кюстнера, при которой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител на коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено. Наиболее целесообразно выявлять антитела-реагины с помощью различных реакций иммунитета - иммуноферментного метода и др. Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием некоторых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед аллергологическим обследованием необходимо в течение 5-7 дней воздержаться от приема этих лекарственных средств.

В диагностике аллергических болезней нельзя полностью полагаться на кожные пробы и переоценивать их результаты. Постановку кожных проб и оценку их результатов проводит только специально обученный медперсонал.

При несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии показаны провокационные пробы. Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания. Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы. Конъюнктивальная провокационная проба проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. Реакция считается положительной при появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век. Назальную провокационную пробу осуществляют при аллергических ринитах и поллинозах: в одну половину носа закапывают аллерген, а в другую - контрольную жидкость. Реакция считается положительной при возникновении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда. Ингаляционный провокационный тест применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя больной вдыхает через рот раствор аллергена. Реакция считается положительной в случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких.

К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, используемые при холодовой и тепловой крапивнице. При отсутствии четких признаков заболевания проводят экспозиционную провокационную пробу. Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в которой больной обычно находится. Противоположной этой пробе является элиминационная проба - исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так называемую безаллергенную палату и др. Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы применяют в диагностике пищевой аллергии и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

1.Реакция кольцепреципитации по Асколи. В узкую пробирку с небольшим количеством неразведенной преципитирующей сыворотки, держа ее в наклонном положении, пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем Аг. экстрагированные кипячением из различного сельскохозяйственного сырья. Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин появляется серовато–белое кольцо. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного Аг. Она нашла также применение в судебной медицине для определения видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при выявлении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав Аг, участвующих в формировании преципитата.

Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vitro.

2. Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в реакции преципита­ ции в геле по Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный агар. Аг и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24–48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы. При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ. Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.

С открытием реагинов в качестве IgE появилась возможность выявить сенсибилизацию с помощью методов in vitro. Клиническая диагностика атопических заболеваний допустима лишь в специализированных лабораториях. Определенную ценность представляют кожные пробы, проводимые как у обследуемых больных, так и у пассивно сенсибилизированных лиц. Впервые местную аллергическую реакцию воспроизвел Blackley в 1873 г. на конъюнктиве и коже больного, сенсибилизированного пыльцой. Аллергические пробы основаны на том, что путем аппликации низких доз аллергена можно вызвать реакцию антиген-антитело. Тестирование аллергена можно воспроизвести на шоковых органах, в частности, при аллергическом рините - на слизистой оболочке носа, при бронхиальной астме - на бронхах. Однако эти методы трудоемки и не всегда безопасны. Наиболее доступны кожные пробы и пробы на слизистой оболочке. Последние рассматривают в качестве провокационного теста, так как они имитируют естественный путь проникновения аллергена в организм.

Кожные пробы . При их постановке исходят из того, что у больных атопией, несмотря на высокую продукцию реагинов на слизистых оболочках и в лимфоидной ткани респираторного и желудочно-кишечного трактов, значительная часть антител поступает в циркуляцию. Этим обусловлено состояние сенсибилизации других органов и тканей. Цель исследования состоит в том, чтобы путем местной аппликации низкой дозы аллергена вызвать реакцию антиген-антитело без риска функциональных нарушений в организме или развития общей реакции. К преимуществам этого метода следует отнести возможность одновременного введения значительного количества аллергенов.

В зависимости от вида аппликации аллергена различают слег дующие тесты: пробу с уколом и скарификационную, внутри- и накожную.

Кожная проба с уколом - это метод выбора при первичном обследовании больного. В предварительно обработанный антисептиком участок (ладонная сторона предплечья, спина) вносят каплю раствора аллергена. Пункцию делают ланцетом, иглой или канюлей. Чтобы облегчить процесс поглощения аллергена, используют модификацию теста - после укола кожу приподнимают, а в месте укола делают легкие насечки. Прокол должен быть поверхностным, чтобы не вызвать кровотечения. Расстояние между тест-участками не менее 4 см. После каждой пробы следует менять или тщательно стерилизовать инструмент, чтобы исключить ложноположительную реакцию. В качестве контроля служат растворы, используемые для приготовления экстрактов (реакция должна быть отрицательной), и свежеприготовленный раствор гистамина для оценки реактивности кожи.

Результаты учитывают через 20 мин. Критерием оценки является средний диаметр зоны волдыря и эритемы.

Скарификационная проба . На поверхности кожи с помощью ланцета делают насечки длиной примерно 0,5 см. В эти участки с определенной мерой предосторожности (стараясь не вызвать кровотечения) вносят и слегка втирают аллерген. Учет реакции аналогичен вышеуказанному. Слег дует иметь в виду, что при скарификации неизбежна разная степень повреждения кожи, поэтому процесс поглощения аллергена трудно контролировать.

Обе пробы обладают рядом преимуществ. Так, они не требуют особых затрат, относительно безопасны и безболезненны. Это особенно важно при назначении проб детям младшего возраста.

Тест «кожное окно» - это фактически модификация скарификационной пробы. На поверхности кожи делают насечки, вносят аллерген и накрывают покровным стеклом. Через 24 ч стекло удаляют и окрашивают для идентификации мигрирующих клеток. Показателем аллергической реакции служит эозинофилия, превышающая 5 %. К недостаткам теста следует отнести то обстоятельство, что результаты его не всегда воспроизводимы.

Внутрикожная проба служит в качестве первичного метода обследования в том случае, если нет указаний на высокую степень сенсибилизации. Обычно тестирование проводят на плече или спине пациента. Кожу обрабатывают спиртом, а затем вводят строго внутрикожно около 0,2 мл экстракта аллергена. Для этой цели удобно использовать канюли № 18 или 20. Из-за высокой чувствительности кожи определить точную дозу аллергена у некоторых больных не представляется возможным. Кроме того, применение высоких доз аллергена сопряжено с травматизацией больного. В качестве контролей служат: раствор для приготовления экстракта (отрицательная реакция) и свежеприготовленный раствор гистамина. Уже через 20 мин возможен учет результатов реакции. Положительный тест сопровождается образованием, волдыря с зоной гиперемии по периферии. Положительная реакция при отрицательном контроле - образование волдыря и зоны гиперемии с диаметрами 7 и 15 мм соответственно. При сравнительном анализе показателей диаметра кожных проявлений и концентраций аллергена или гистамина была выявлена определенная закономерность.

Результаты кожных проб и их интерпретация.

1. Местные реакции. а) Ранняя реакция наступает через 10 мин и достигает максимума спустя 20-30 мин (диаметр волдыря 1 мм, зоны эритемы - 15 мм). б) При более высокой концентрации антигена часто наблюдают реакцию замедленного типа (при поллинозах, сенсибилизации, вызванной шерстью животных). У части обследуемых лиц она обусловлена продукцией преципитинов. Было доказано, что антитела IgE-класса могут вызвать реакцию замедленного типа с образованием через 4-12 ч эритемы и отека, сопровождаемых зудом, а иногда и болезненными ощущениями. При гистологическом анализе наряду с отеком выявляют инфильтрацию эозинофилами, нейтрофилами и мононуклеарными клетками. По всей вероятности, определенную роль играют такие факторы, как калликреин и ФХН-А.

2. Общие реакции. У больных нередко отмечают очаговые реакции, сопровождаемые симптомами основного заболевания. Этому способствует готовность к иммунному ответу шоковых органов. Такая реакция, безусловно, нежелательна. С другой стороны, ее проявление можно рассматривать как доказательство патогенетического значения данной сенсибилизации.

Тяжелые формы осложнений наблюдают прежде всего при высокой степени сенсибилизации. Наиболее опасен анафилактический шок.

Выбор аллергена. В принципе возможны три варианта кожных проб:

- «Тест подтверждения» (вводят те аллергены, которые, как предполагают, имеют патогенетическое значение). В этом случае врач основывается на данных анамнеза.

Тест «поиска» назначают больным, у которых в анамнезе отсутствуют данные, требующие подтверждения или пересмотра. При этом выбор аллергенов не ограничен.

Определение степени сенсибилизации. Воспроизводят так называемое титрование кожи, т. е. вводят определенное количество аллергена для выбора дозы, используемой в провокационном тесте или начальной дозы при десенсибилизации, а также для контроля за последней. Эти индикаторные тесты важны для подбора соответствующего экстракта и дозы аллергена. В реакциях не применяют веществ, с которыми больной не был в контакте. Не исключено использование и смеси экстрактов. Вот почему апробацию тест аллергенов должен проводить врач, хорошо знающий анамнез и характер заболевания.

Рассмотрим наиболее распространенные группы аллергенов.

А) Пыльца: трав (лисохвост, ежа сборная, бухарник, гребневик, пырей, крапива, овсяница, подорожник, щавель, плевел многолетний); цветов (маргаритка, кипрей, мак, тюльпан, золотарник, чистяк, одуванчик, сердечник луговой, лютик); злаковых (рожь); кустарников (шиповник, бузина, роза собачья, сирень, лесной орех); деревьев (береза, липа, белая акация, ива, сосна, ольха, каштан, вишня).

Б) Элементы эпидермиса животных и человека: перхоть (кролика, кошки, собаки, барана, быка, козы, свиньи, лошади); перья (гуся, утки и курицы); перхоть человека.

В) Домашняя пыль.

Г) Клещи.

Д) Плесневые грибы: Penicillium, Aspergillus, Mucor, Cladosporium, Hormodendrum, Alternaria.

Е) Продукты питания: пресноводные рыбы (форель, щука, карп, линь, судак); морские и океанические виды рыб (треска, ерш, сельдь, макрель); мясо (свинина, говядина, баранина, конина, козлятина, птица); молоко (коровье и козье, свежее и кипяченое), яйца (белок и желток); злаковые культуры (мука и отруби пшеницы, рожь, ячмень, овес, кукуруза); фрукты и бобовые.

На результаты тест-реакций влияют следующие неспецифические факторы:

1. Местное кровоснабжение. В холодное время года у больного могут возникнуть сосудистые нарушения, в таких случаях необходимо восстановить температуру кожи до нормальной (с этой целью кожу протирают спиртом или эфиром). Нежелательным последствием кожных проб является и выраженная реакция в виде гиперемии.

2. Участок введения аллергена. Отмечено, что реакции, вызываемые на спине, более выражены, чем на плече. Однако и» этого не следует, что реакция на плече может быть ложноотрицательной. Результаты могут зависеть от влияния погоды, ультрафиолетового и рентгеновского облучения.

3. Естественный контакт с аллергеном. Непосредственно после реакций, вызванных массивными дозами аллергена, происходит некоторое снижение уровня антител. Длительное устранение аллергена (более 1 года) также дает этот эффект. По сравнению с этим продолжительный контакт с аллергеном, например в сезон цветения трав, может привести к усилению реакции.

4. Лекарственные средства. Антигистаминные препараты в соответствующих дозах могут подавлять тест-реакцию, поэтому их следует отменить за 2-7 дней, а производные адреналина - за один день до постановки кожных проб. Изопреналин, вводимый путем ингаляции, не оказывает значительного влияния. Слабо выражен эффект и эуфиллина. Кортикостероиды и АКТГ в терапевтических дозах оказывают незначительное воздействие на реакцию немедленного типа. Только высокие дозы кортикостероидов или их местное применение могут ослабить реакцию. Отмечено подавление кортикоидами замедленной (поздней) фазы реакции.

5. Возраст. Сравнительный анализ показал, что у детей младшего возраста кожные реакции менее выражены, чем у взрослых. Это связано не только с низкими концентрациями реагина. Установлено, что при пассивной сенсибилизации кожи одной и той же сывороткой степень выраженности реакций у детей значительно ниже. Невысокий уровень сенсибилизации выявлен также у детей в течение 1-го года жизни. Между группами лиц молодого и среднего возраста различий, как правило, нет. Лишь у части больных старше 50 лет наблюдают снижение ответа на аллерген и одновременно концентрации специфического IgE.

6. Суточные биоритмы также могут оказывать влияние на показатели кожных проб (отмечены колебания реакции в пределах 5-71% от среднего уровня). Минимум отклонений наблюдают около 11.00 ч, максимум - в 23.00. Считают, что данное явление связано с продукцией гормонов, в частности, 17-гидроксикортикостероидов.

Если исключить все возможные ошибки метода, то положительные результаты кожных проб доказывают факт сенсибилизации, специфической в иммунологическом смысле. Тем не менее они не всегда могут подтвердить диагноз заболевания. Отрицательная реакция также не исключает возможность сенсибилизации. Кроме того, на основании выраженности реакции нельзя сделать вывод о патогенетическом значении результатов данного теста.

Ложноотрицательная реакция может быть обусловлена следующими ошибками:

Превышение срока годности экстрактов, утративших активность аллергена;

Отсутствие конкретного аллергена (особенно это характерно при подозрении на аллергию к домашней пыли);

Нефизиологический способ введения аллергена (целый ряд аллергенов поступает в организм с пищей и лекарственными средствами), при отрицательной реакции назначают провокационный тест;

Ранние стадии сенсибилизации (клинические проявления аллергии возможны уже на ранних стадиях заболевания, поскольку синтезируемые реагины быстро связываются на клеточной поверхности; однако концентрация последних может оказаться недостаточно высокой, чтобы вызвать положительную реакцию);

Сниженная способность к иммунному ответу, связанная с приемом лекарственных препаратов, возрастом больного и т. д. В этих случаях снижены показатели и контрольной пробы с гистамином.

Ложноположительную реакцию могут вызвать причины, приводимые ниже:

Раздражающее действие аллергенов (на основании результатов кожных проб у здоровых лиц были выбраны и рекомендованы оптимальные индивидуальные дозы аллергенов);

Повышенная чувствительность кожи (механическое раздражение, крапивница, положительная контрольная реакция).

Анализ анамнестических данных и результатов кожных проб выявил следующие закономерности:

1) Если кожная проба положительна и аллерген известен, то факт сенсибилизации не вызывает сомнения.

2) Если реакция отрицательна и аллерген не установлен, то рассматриваемый аллерген едва ли служит причиной заболевания.

3) Если при положительной пробе отсутствуют сведения об аллергене, то следует пересмотреть данные анамнеза, а также удостовериться в истинной причине положительных результатов реакции. Известно состояние, которое обозначают как «латентная сенсибилизация». Кроме того, после клинического выздоровления у больных нередко в течение длительного времени сохраняется положительная кожная проба. В ряде случаев выявляют «субклиническую сенсибилизацию». Эти возможные причины положительного теста следует учитывать.

Осложнения при кожной пробе . Основная опасность возникает при аппликации высоких доз аллергена: наиболее вероятно развитие поздней и общей реакций. Наряду с угрозой обострения состояния больного может проявляться вся симптоматика аллергических состояний, включая анафилактический шок.

Провокационный тест - это надежный метод тестирования аллергена, при котором характерные симптомы вызывает аппликация предполагаемого вещества физиологичным путем. Разные варианты теста должны отвечать двум требованиям: 1- по возможности тест-аллерген должен быть введен в разных дозах в соответствующий орган, 2 - оценка реакции антиген - антитело должна быть объективной.

Условием проведения теста является отсутствие естественного контакта с аллергеном, так как иначе это значительно осложняет интерпретацию результатов. Целесообразно, чтобы больной не знал о том, какой аллерген ему вводят («слепой» метод). Контролем служит тест с использованием раствора для приготовления экстракта (плацебо).

Проба с исключением предполагаемого аллергена, ответственного за атопическую реакцию. Обычно исходят из анамнестических данных. Этот тест применяют при диагностике прогрессирующих стадий заболевания, чтобы определить шансы больного на выздоровление.