Определение бактериология. Бактериология медицинская. Что такое питательная среда

[Медицинская астрология] Также каждому врачу идущей эпохи очень советуется знакомство с астрологией. Она может быть большим подспорьем при трудных диагнозах и при определении удачного времени для той или иной операции. Статистика показала, что все выдающиеся врачи

Медицинская мантра

Медицинская мантра В то время, как не является сюрпризом то, что трансцендентальная медитация уменьшает стресс, сейчас исследователи показывают, что использование ТМ для достижения более высокого состояния сознания может помочь очищению артерий. Афро-американцы с

Бактериология

БАКТЕРИОЛОГИЯ КИСЛОЙ КАПУСТЫ

БАКТЕРИОЛОГИЯ КИСЛОЙ КАПУСТЫ Сообщая о бактериологических характеристиках кислой капусты в журнале «Химия и технология продуктов питания», Моррис Якобе указывает, что присутствие вредных низкокислотных или совсем бескислых организмов на только что срезанных листьях

Темы практических занятий раздела «Частная медицинская бактериология и микология».

1. Общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

2. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов.

3. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, дизентерии, эшерихиозов. Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов.

4. Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.

5. Микробиологический диагноз холеры (окончание). Итог по разделу «Возбудители кишечных инфекций».

6. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками.

7. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками (продолжение), грамотрицательными палочковидными микроорганизмами и анаэробными микроорганизмами.

8. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии.

9. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, дифтерии (окончание). Микробиологическая диагностика коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза.

10. Итог по разделу «Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками, грамотрицательными палочковидными и анаэробными микроорганизмами. Микробиологическая диагностика дифтерии, коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза».

11. Микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы.

12. Микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов.

13. Микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов.

Исследование бактерий имеет большое практическое значение для человека. На сегодняшний день открыто большое количество прокариот, которые отличаются друг от друга по патогенности, области распространения, форме, размерам, количеству жгутиков и другим параметрам. Чтобы детально изучить данный штамм, применяется бактериологический метод исследования.

Какие существуют методы клеток?

Чтобы определить, являются ли бактерии патогенными, проводят исследование культуры различными способами. Среди них:

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологический метод.

3. Биологический метод.

Бактериоскопический и бактериологический основаны непосредственно на работе с клетками прокариот, когда биологический анализ требуется для изучения влияния таких клеток на живой организм подопытных животных. По степени проявления тех или иных признаков заболевания ученый может сделать вывод о наличии или отсутствии патогенных бактерий в пробе, а также естественно их размножить в организме животного для получения их культуры и использования в других работах.

Бактериологический метод исследования отличается от бактериоскопического. В первом для анализа используется специально подготовленная культура живых прокариот, когда во втором проводится работа с мертвыми или живыми клетками на предметном стекле.

Этапы бактериологического метода исследования. Микробиология

Принцип изучения свойств бактериальной культуры может пригодиться как для ученых-микробиологов, которые поставили цель исследовать прокариотические клетки, так и для лаборантов, задача которых заключается в установлении патогенности или непатогенности бактерий, а затем диагноза пациента.

Методика изучения бактерий делится на три этапа:

1. Выделение бактерий из первоначальной пробы.

2. Высевание бактерий и выращивание изучение ее свойств.

Первый этап

Проба, или мазок, берется со свободной поверхности среды или у пациента. Таким образом мы получаем «коктейль» из множества видов бактерий, которые должны высеять на питательную среду. Иногда появляется возможность выделить сразу необходимые бактерии, зная их очаги распространения в организме.

Через двое-трое суток отбираются нужные колонии и высеваются на твердые среды чашек Петри с помочью стерильной петли. Во множестве лабораторий работают с пробирками, где может находиться твердая или жидкая питательная среда. Так и проводится бактериологический метод исследования в микробиологии.

Второй этап

После получения отдельных колоний бактерий проводится непосредственный макро- и микроанализ. Измеряются все параметры колоний, определяется цвет и форма каждой из них. Нередко проводится подсчет колоний на чашке Петри, а затем в исходном материале. Это имеет значение при анализе патогенных бактерий, от числа которых зависит степень заболевания.

Бактериологический метод исследования, 2 этап которого заключается в изучении отдельных колоний микроорганизмов, может быть сопряжен с биологическим способом анализа бактерий. Еще одна цель работы на этом этапе - увеличить количество исходного материала. Это можно сделать на питательной среде, а можно провести эксперимент в естественных условиях на живых подопытных организмах. Патогенные бактерии будут размножаться, и в результате кровь будет содержать миллионы клеток прокариот. Из взятой крови легко приготовить необходимый рабочий материал бактерий.

Третий этап

Самая важная часть исследования - это определение морфологических, биохимических, токсигенных и антигенных свойств культуры бактерий. Работа ведется с заранее «очищенными» культурами на питательной среде, а также с препаратами (зачастую окрашенными) под микроскопом.

Установить принадлежность патогенных или условно-патогенных бактерий к той или иной систематической группе, а также определить их устойчивость к лекарствам позволяет бактериологический метод исследования. 3 этап - антибиотики, т. е. анализ поведения клеток бактерий в условиях содержания лекарственных препаратов в окружающей среде.

Исследование устойчивости культуры к антибиотику имеет важное практическое значение, когда необходимо прописать для конкретного пациента необходимые, а главное, действенные препараты. Здесь и может помочь бактериологический метод исследования.

Что такое питательная среда?

Для развития и размножения бактерии должны находиться в заранее подготовленных питательных средах. По консистенции они могут быть жидкие или твердые, а по происхождению - растительные или животные.

Основные требования к питательным средам:

1. Стерильность.

2. Максимальная прозрачность.

3. Оптимальные показатели кислотности, активности воды и других биологических величин.

Получение изолированных колоний

1. Метод Дригальского. Он заключается в том, что на бактериальную петлю наносится мазок с различными видами микроорганизмов. Этой петлей проводят по первой чашке Петри с питательной средой. Далее, не меняя петлю, методом остаточного материала проводят по второй и третьей чашкам Петри. Так, на последних образцах колонии бактерии будут засеваться не слишком плотно, тем самым упрощается возможность найти необходимые для работы бактерии.

2. Метод Коха. В нем используются пробирки с расплавленной питательной средой. Туда помещается петля или пипетка с мазком бактерий, после чего содержимое пробирки выливается на специальную пластинку. Агар (или желатин) застывает через какое-то время, а в его толще легко обнаружить нужные колонии клеток. Важно перед началом работы развести смесь бактерий в пробирках, чтобы концентрация микроорганизмов не была очень большой.

Этапы которого основаны на выделении нужной культуры бактерий, не обходится без этих двух способов нахождения изолированных колоний.

Антибиотикограмма

Визуально реакцию бактерий на препараты можно заметить двумя практическими способами:

1. Метод бумажных дисков.

2. Разведение бактерий и антибиотика в жидкостной среде.

Метод бумажных дисков требует наличия культуры микроорганизмов, которые были выращены на твердой питательной среде. На такую среду кладут несколько бумажек округлой формы, пропитанных антибиотиками. Если препарат успешно справляется с нейтрализацией бактериальных клеток, после такой обработки останется участок, лишенный колоний. Если же реакция на антибиотик отрицательная, бактерии выживут.

В случае использования жидкой питательной среды сперва готовят несколько пробирок с культурой бактерий разных степеней разведения. В эти пробирки добавляют антибиотики, и в течение суток наблюдают за процессом взаимодействия вещества и микроорганизмов. В конечном итоге получается качественная антибиотикограмма, по которой можно судить об эффективности препарата для данной культуры.

Основные задачи анализа

Здесь перечислены по пунктам цели и этапы бактериологического метода исследования.

1. Получить исходный материал, который будет использоваться для выделения колоний бактерий. Это может быть мазок с поверхности любого предмета, слизистой оболочки или полости органа человека, анализ крови.

2. на твердой питательной среде. Через 24-48 часов на чашке Петри можно обнаружить колонии бактерий разных видов. Отбираем по морфологическим и/или биохимическим критериям нужную и проводим уже с ней дальнейшую работу.

3. Размножение полученной культуры. Бактериологический метод исследования может опираться на механический или биологический способ увеличения численности культуры бактерии. В первом случае ведется работа с твердыми или жидкими питательными средами, на которых в термостате размножаются бактерии и образуют новые колонии. Биологический способ требует естественных условий увеличения численности бактерий, поэтому здесь микроорганизмами заражается подопытное животное. Через несколько суток в пробе крови или мазке можно обнаружить множество прокариот.

4. Работа с очищенной культурой. Чтобы определить систематическое положение бактерий, а также их принадлежность к возбудителям заболеваний, необходимо провести тщательный анализ клеток по морфологическим и биохимическим признакам. При исследовании патогенных групп микроорганизмов важно знать, насколько эффективно действие антибиотиков.

Это была общая характеристика бактериологического метода исследования.

Особенности проведения анализа

Главное правило проведения бактериологического исследования - это максимальная стерильность. Если идет работа с пробирками, посевы и пересевы бактерий должны проводиться только над нагретой спиртовкой.

Все этапы бактериологического метода исследования требуют использования специальной петли или пастеровской пипетки. Оба инструмента должны быть предварительно обработаны в пламени спиртовки. Что касается пастеровской пипетки, то тут перед термической стерилизацией необходимо отломать кончик пипетки пинцетом.

Техника посева бактерий тоже имеет свои особенности. Во-первых, при посеве на твердые среды проводят бактериальной петлей по поверхности агара. Петля, конечно же, уже должна иметь на поверхности образец микроорганизмов. Также практикуется посев внутрь и в этом случае петля или пипетка должны достичь дна чашки Петри.

При работе с жидкими средами используются пробирки. Здесь важно следить, чтобы жидкости не касались краев лабораторной посуды или пробки, а используемые инструменты (пипетка, петля) не дотрагивались до посторонних предметов и поверхностей.

Значение биологического метода исследования

Анализ пробы бактерий имеет свое практическое применение. Прежде всего бактериологический метод исследования может использоваться в медицине. К примеру, необходимо изучить микрофлору больного, чтобы установить правильный диагноз, а также выработать правильный ход лечения. Здесь помогает антибиотикограмма, которая покажет активность лекарственных препаратов против возбудителя заболеваний.

Анализ бактерий используется в лаборатории для определения таких опасных заболеваний, как туберкулез, возвратный тиф или гонорея. Также он применяется для изучения бактериального состава миндалин, полостей органов.

Бактериологический метод исследования можно использовать для определения загрязненности среды. По данным о количественном и качественном составе мазка с поверхности какого-либо предмета определяется степень заселенности данной среды микроорганизмами.

Институт Пастера в Париже: 1 - фасад главного здания; 2 - госпиталь; 3 - лаборатория. Б. М. Э.

Институт Коха в Берлине: 1 - фасад главного здания; 2 и 3 - лаборатория.

Занятие № 19

СТАФИЛОКОККИ. СТРЕПТОКОККИ. НЕЙССЕРИИ

Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками, стрептококками, нейссериями

Приготовление мазка из гноя (см. Занятие №1), окраска по Граму (см. Занятие№2) , микроскопия и зарисовка препарата.

Микроскопия и зарисовка мазка из уретрального гноя больного гонореей и мазка из спинномозговой жидкости больного менингококковым менингитом.

Занятие № 20

КИШЕЧНАЯ ПАЛОЧКА. ШИГЕЛЛЫ. САЛЬМОНЕЛЛЫ

Микробиологическая диагностика колиэнтеритов, бактериальной дизентерии, сальмонеллезов

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

Посев испражнений больного на чашку со средой Эндо или Плоскирева (см. Занятие №5).

Отбор бесцветных или цветных колоний, приготовление из них мазков (см. Занятие №1), окраска по Граму (см. Занятие№2), микроскопирование и зарисовка препаратов.

Постановка пластинчатой ориентировочной РА (см. Занятие №13) с поливалентными эшерихиозными, шигеллезными и сальмонеллезными сыворотками.

Пересев агглютинабельных колоний на среду Клиглера (Олькеницкого) (см. Занятие №5).

Занятие № 21

УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИИ. ПСЕВДОМОНАДЫ. КАМПИЛОБАКТЕРЫ. ГЕЛИКОБАКТЕР

Микробиологическая диагностика клебсиеллезов, иерсениозов, протейных заболеваний, синегнойной инфекции, кампило- и геликобактериоза

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Засев патологического материала по Щукевичу для выделения протея.

Метод Щукевича используют для идентификации протея по наличию феномена роения (повышенной подвижности).

Материал, содержащий бактерии, засевают в пробирки со скошенным МПА. предварительно стерилизуя петлю, вносят культуру в конденсат у основания скошенного МПА, стараясь не касаться краев пробирки и поверхности агара.

Протей обладает феноменом «роения», при этом колонии как бы расползаются, быстро покрывая всю поверхность скошенного агара даже там, где посев не проводили.

Добавление к МПА фенола ингибирует «роение», и рост бактерий происходит локально только в месте посева – у основания скошенного агара.

Занятие № 22

Вибрионы. Бруцеллы. Франциселлы. Yersinia pestis. Бациллы Микробиологическая диагностика холеры, бруцеллеза, туляремии, чумы, сибирской язвы Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

Посев испражнений на щелочную пептонную воду.

Микроскопия мазков с туляремийными бактериями и бруцеллами.

Микроскопия мазка из антракоидов, окрашенных по Граму.

Посев испражнений на щелочную пептонную воду для идентификации холерного вибриона.

Испражнения засевают в пробирки с 1% щелочной пептонной водой (селективная среда), предварительно стерилизуя петлю в пламени спиртовки до забора материала и после засева.

При этом края пробирок с испражнениями фламбируют в пламени спиртовки до и после взятия материала, а края пробирок с питательной средой – до и после засева.

Пробирки с посевами ставят в термостат на 6 - 8 часов при 37 0 С.

Холерный вибрион при выращивании в 1% щелочной пептонной воде через 6-8 часов образует нежную плёнку на поверхности среды.